GE公司培训讲义—凝胶过滤层析技术

《GE公司培训讲义—凝胶过滤层析技术》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、GelfiltrationContent内容凝胶过滤层析技术Principlesofgelfiltration凝胶过滤原理Optimize:Howtogettheexpectedresults优化Productsandapplications产品和应用Practicalconsiderations实际需考虑的因素Summary总结Content内容Whatisgelfiltration凝胶过滤定义?Gelfiltration(GF)isasimpleandreliablePrinciplesofgelf

2、iltration凝胶过滤原理chromatographicmethodforseparatingOptimize:Howtogettheexpectedresults优化moleculesaccordingtosizeandshape.Productsandapplications产品和应用凝胶过滤层析是根据分子大小和形状的差异进Practicalconsiderations实际需考虑的因素行分离的一种简单可靠的层析技术。Summary总结Gelstructure填料结构凝胶过滤分离原理:空间排阻AG

3、AROSE琼脂糖凝胶1.Sphericalparticlespackedintoacolumn.Agoodgelforgelfiltrationcontainsabout95%water凝胶过滤填料的95%为水2.Sampleapplied.3.Buffer(mobilephase)andsample4.Largemoleculesleavethecolumnmovethroughcolumn.Moleculesfirstfollowedbysmallermoleculesindiffuseinando

4、utofmatrixorderofsize.Moleculeslargerthanthematrixporespassstraightthrough.DiffusionDiffusionoutoftheporesBufferBuffer-poresfilledwitheluent孔内充满洗脱液Diffusionintothepores-carefullycontrolledsizerange孔径精密控制-chemically/physicallyinert(lackofadsorptivepropert

5、ies)惰性1/GE/StericexclusionleadstoearlyelutionSeparationvolumes分离体积体积排阻程度决定洗脱位置VoVtMoleculeseluteinorderofsize.VVVVR1R2R3R4voidvolumeVo不同分子按照大小顺序洗出volumeofthegelmatrixVsThelargestmoleculeselutefirst;Vcthesmallestoneselutelast.大分子先洗出,小分子后洗出porevolumeViV=vo

6、idvolume外水体积oV=retentionvolumeorelutionvolume保留体积/洗脱体积RV=totalliquidvolumeofthebed总液体体积tV=innerporevolume=V-V–V内孔体积/内水体积icsoV=totalgeometricvolumeofthecolumn柱体积cV=volumeofgelmatrix固相凝胶的体积sThevoidvolumeVo外水体积VtandVc总液体体积和柱体积非常大的分子在外水体积洗出,Vo非常小的分子的洗脱体积为内水+

7、外水V=V+Vt0iconcentrationconcentration柱床的几何体积,VcVovolumeVovolumeVVRRVtVcDistributioncoefficient,Kd分配系数ThecoefficientKavVR-V0VR-V0VR-V0K==K=V=保留体积/洗脱体积dV-V-VVRavV-Vc0siVo=排阻体积/外水体积c0V=层析柱几何体积ci.e.,VR=Vo+Kd*ViVs=固相凝胶所占的体积-与柱子大小和填装无关V=孔内体积/内水体积=V-V–Vicso-可以用于

8、比较不同的纯化结果-VR:外水体积+能进入的那部分内水体积-Kd:溶质分子能够进入的内水体积(内水体积)占总的内水体积的比例Kav容易得到，也更有实际意义Kd较难测定,常用Kav代替2/GE/KavforverylargeandverysmallKav应该在0和1之间molecules非常大的分子在V0处洗脱VR=V0elutionwithK>1V-VV0-V0av==R0=Adsorptionhasoccurred.K0concentra