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《AccQ·Tag氨基酸分析方法(普通C18柱)》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、AccQ·Tag氨基酸分析方法氨基酸分析的特点❀多数氨基酸没有“显色基团”✎无法用简单的方法检测❀所有的氨基酸极性都很大,无法反相分离+-RCH(NH)COO3❀需要进行处理：“衍生”✎增加显色基团，提高检测灵敏度✎改变样品的极性，改变分离模式氨基酸样品衍生的目的❀提高检测的灵敏度✎增加紫外基团以增强紫外检测的灵敏度✎增加荧光基团以便使用高灵敏度荧光检测器❀改变分离的选择性✎改变组份的基团，如：➠变离子型化合物为非离子型，用反相方法分离什么是AccQ·Tag方法方法？方法？❀AccQ·Tag方法是一种用于肽及蛋白质水解氨基酸分析的柱前衍生技术❀AccQ·Tag方法的内容包括:✎用Wat
2、ers的AccQ·Fluor™衍生试剂(AQC)衍生氨基酸✎用反相HPLC分离衍生产物✎用荧光或紫外检测器定量检测衍生产物AccQ·Tag方法的基础❀AccQ·Tag方法的基础在于专为氨基酸分析而开发的衍生试剂-AQC(6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯)❀AQC是含N-羟基琥珀酰亚氨基的活性杂环氨基甲酸酯,它是一种新型氨基衍生化试剂,结构如下:HONONNOOAQC衍生试剂AccQ·Tag方法对仪器的要求❀一套WatersHPLC梯度系统:✎2690(含脱气装置和柱温箱)-2487和/或474检测器_M32色谱管理系统✎600_在线脱气机_柱温箱_717(或7725i)_
3、2487和/或474_M32色谱管理系统✎515×2_PCM_Mixer_柱温箱_TCM_717(或7725i)_2487和/或474_M32色谱管理系统❀若非Waters的HPLC系统,则由于泵精度和仪器系统体积等原因,可能得不到满意的分析结果AccQ·Tag方法所需的辅助设备❀衍生用:✎涡旋搅拌器✎微量移液器(1-100µl)✎烘箱(可恒温至55℃)❀配制流动相用:✎超声波清洗器✎pH计(精确到0.01)✎溶剂过滤装置✎100ml和1000ml量筒✎500ml或1000ml烧杯✎纯水器(可制备18MΩ无有机污染物之高纯水)AccQ·Tag方法必需化学品❀一套WatersAccQ·T
4、ag化学组件包,包括:✎WatersAccQ·Fluor试剂盒-含有下述三种试剂各5瓶∶➠WatersAccQ·Fluor硼酸缓冲液(Buffer1)➠WatersAccQ·Fluor衍生剂粉末(2A)➠WatersAccQ·Fluor衍生剂稀释液(2B)✎WatersAccQ·Tag氨基酸分析柱✎AccQ·TagEluentA浓液—一种预混合好的浓缓冲液✎Waters氨基酸水解标样—10×1ml安瓿瓶装水解氨基酸标样.每一瓶含17种水解氨基酸各2.5mM(胱氨酸为1.25mM)✎6×50mm样品管—用于衍生样品和标样✎WatersAccQ·Tag化学组件包使用手册—详细介绍AccQ·
5、Tag氨基酸分析方法的操作及问题解答关于AccQ·Fluor试剂盒❀超纯试剂级的质量控制:✎AccQ·Fluor试剂盒中的三种试剂均经严格质量控制:原料的质量控制,超净车间的生产环境,反复重结晶的工艺及产品的质量测试,确保衍生空白的背景氨基酸干扰降至最低(＜2pmol)✎WatersAccQ·Fluor硼酸缓冲液(Buffer1)控制三种主要污染物的含量:亚胺二乙酸＜13ppb,甘氨酸＜8ppb,丙氨酸＜9ppb✎WatersAccQ·Fluor衍生剂粉末(2A)在氩气净化的隔离罩内合成,经昂贵的重结晶,确保氨基酸背景降至最低✎WatersAccQ·Fluor衍生剂稀释液(2B)用低含
6、水量(＜0.003%)的HPLC级乙腈,经去除甲醇处理(＜50ppb)AccQ·Tag方法所需化学品❀AccQ·Fluor试剂盒需要从Waters订购❀AccQ·Tag化学组件包中部分可代用的化学品:✎AccQ·Tag氨基酸分析柱:➠基质与NovaPakC18柱相同,必要时可考虑用其代用,但需筛选,并非每根都能用✎AccQ·TagEluentA液➠配方为140mM乙酸钠+17mM三乙胺+1mg/mlEDTA二钠盐,用1:1HPO调至pH=4.95(用于紫外检测)或5.05(用于荧光检测)+0.5%34NaN(防止长菌)3➠若每天配制,当日用完,可不加NaN3➠A液中所需各种化学品纯度级
7、别最好是优级纯➠配制用水需高纯水,或用KMnO重蒸之蒸馏水4AccQ·Tag方法所需其它化学品❀内标物:✎α－氨基丁酸(AABA)试剂级❀流动相:✎MilliQ水18MΩ高纯水)✎乙腈HPLC级❀配制A液所需化学品:✎浓磷酸保证试剂✎EDTA二钠盐A.R.✎三水乙酸钠A.R.✎叠氮化钠试剂级✎三乙胺(TEA)A.R.AccQ·Tag方法所需其它化学品❀过甲酸氧化法分析饲料中蛋氨酸和胱氨酸所需标样:✎磺基丙氨酸(Cya)试剂级✎蛋氨酸砜(MetS
