乳腺癌患者血清和组织中miR-494的表达及其临床意义

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1、分类号密级UDC江汉大学学位论文乳腺癌患者血清和组织中miR-494的表达及其临床意义靳雪芹导师姓名职称卢忠心教授镇鸿燕副教授申请学位级别硕士学科专业名称肿瘤学论文提交日期年月日论文答辩日期年月日学位授予单位江汉大学答辩委员会主席_______________________________________________学位论文评阅人_______________________________________________江汉大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅

2、和借阅。本人授权江汉大学可以将本论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复印手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于1．保密□，在___年解密后适用本授权书；2．不保密□，使用本授权书。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导老师签名：日期：日期学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文系本人在导师指导下独立完成的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标记和致谢的部分外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含本人为获得任何教育机构的学位或学历而使用过的材料。与我一同工作的同事对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示

3、谢意。本人如违反上述声明，愿意承担由此引发的一切责任和后果。研究生签名：日期：年月日江汉大学硕士研究生学位论文第II页摘要目的:探讨miR-494在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中的表达及其与乳腺癌临床分期、转移和预后的关系。方法:回顾性研究。用实时荧光定量聚合酶链反应（quantitativereal-timepolymerasechainreaction，qRT-PCR）检测5种乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MDA-MB-453、HCC-1937、MDA-MB-468、MCF-7和1株乳腺上皮细胞系HBL-100中miR-494的表达水平；同时用qRT-PCR方法检测miR-494在

4、54对乳腺癌组织和癌旁组织中的表达水平；用脂质体将miR-494表达质粒（pSIF-miR-494）和阴性对照组（pSIF空白载体）转染入乳腺癌细胞系MDA-MB-231后用划痕和侵袭实验Transwell）检测miR-494对细胞迁移和侵袭力的影响；利用生物信息学软件预测miR-494的靶基因是VASH2，利用免疫印迹法（Westernblot）检测miR-494对靶基因VASH2的抑制作用。结果:乳腺癌组织中miR-494的表达量为0.16±0.26，癌旁组织中miR-494表达量0.53±0.66，乳腺癌组织中miR-494的表达量明显低于癌旁组织（P＜0.01）。乳腺癌细胞系（

5、MDA-MB-231、MDA-MB-453、HCC-1937、MDA-MB-468、MCF-7）中miR-494的表达量相对正常乳腺上皮细胞明显降低（t值分别为212.9、37.73、27.53、10.61、19.46，P值均＜0.05）。在乳腺癌细胞系MDA-MB-231中过表达miR-494后，划痕实验证明肿瘤细胞的迁移能力明显受到抑制；Transwell侵袭实验显示上调miR-494后肿瘤细胞穿过基质胶的平均数为（122±20）个；对照组为（598±24）个（P＜0.01）；验证了过表达miR-494能够明显减弱乳腺癌细胞的侵袭能力。同样转染了miR-494表达质粒后能够显著抑制

6、其靶基因VASH2的蛋白表达，Westernblot结果显示阴性对照组蛋白相对灰度值为1.35±0.05，转染miR-494表达质粒组蛋白相对灰度值为0.64±0.07，过表达miR-494能够明显抑制VASH2蛋白表达（t=9.27，P＜0.05）。此外，miR-494在乳腺癌组织中的表达水平亦明显低于癌旁组织（t=5.80，P＜0.01），且与临床分期（χ2=17.41，P＜0.05）、组织病理分级（χ2=5.33，P＜0.05）、C-erbB-2表达情况（χ2=9.83，P＜0.05）、Ki-67阳性细胞百分比（χ2=6.13，P＜0.05）有关。结论:miR-494在乳腺癌组织

7、和乳腺癌细胞系中低表达，且与乳腺癌临床分期和预后关系密切，可能成为乳腺癌辅助诊断和预后判断的新的分子标志。关键词：微小RNA-494；乳腺癌；预后;VASH-2江汉大学硕士研究生学位论文第III页AbstractObjective:ToinvestigatetheexpressionofmiRNA-494inbreastcancertissueofpatientsandbreastcancercelllinesanditsrelationshi