实验9-气相色谱、内标法测定蘑菇醇的含量

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1、内标法测定蘑菇醇的含量【摘要】气相色谱法（GC）分离效率、选择性、灵敏度都很高，适用于热稳定性好、易挥发的物质。外标法通过配置标准溶液来制作工作曲线，但使用溶液体积很少时误差较大，可以通过加入内标物减小误差。本实验通过内标法和气相色谱法来测定未知物中的蘑菇醇含量。【关键字】气相色谱内标法蘑菇醇【实验目的】1、了解气相色谱法的基本原理及仪器结构。2、了解气相色谱基本仪器操作。3、掌握内标法的配样与计算方法。【基本原理】□原理概述：气质联用仪（GC・MS）近年来在有机化学领域起到越来越重要的作用，其原理是利用气相色谱的

2、分离能力，将样品各组分分离开，然后对各组分进行质谱分析，得出组分信息。再利用内标法制作工作曲线来计算未知物浓度。•气相色谱法（GC）:是利用气体作流动相的色层分离分析方法。优点：分离效率、选择性、灵敏度都很高。缺点：只适用于热稳定性好、易挥发的物质。•内标法：在分析测定样品屮某组分含量时，加入一种内标物质以校准和消除出于操作条件的波动而对分析结果产生的影响，以提高分析结果的准确度。内标物的选择要求：1、是能得到纯样的己知化合物;2、和被分析的样吊组分有基木相同的物理化学性质(化学结构、极性、挥发度及在溶剂中的溶解度

3、等)、色谱行为和响应特征，最好是被分析物质的一个同系物;3、不与样品中各组分充分分离发牛反应;4、既可被色谱柱所分离，又不受试样中其它组分峰的干扰,原理：只要测逹内标物和待测组分的峰面积与相对响应值，即可求出待测组分在样品中的百分含量:mx4m:样品的质量；ms：待测样品中加入内标物的量；As:待测样品中内标物的峰面积；Az：组分r与内标物的校正因子之比，称为相对校正因子。・蘑菇醇：即1-辛烯-3-醇分子式：C8H16O；CH3-分子量：128.21应用：用于FI化和食用香精；作为化学合成原料，应用於制药领域；作为

4、蚊虫引诱剂，应用于杀蚊制品。图1蘑菇醇结构式【仪器与试剂】1、仪器:Ag订ent7890N气相色谱仪,10gl进样针，1000^1移液枪。2、试剂：蘑菇醇储备样(10.107mg/ml),内标物(10.140mg/ml),蘑菇醇未知样，乙睛溶液。【实验步骤】1、配制标准溶液：以移液枪分别移取200、400、600、800、lOOOyl蘑菇醇储备液和400、400、400、400、400^1氯苯储备液与5ml容量瓶中，用乙腊定容到刻度。2、配制未知溶液：以移液枪量取200pl蘑菇醇未知液和400卩1氯苯储备液与5ml

5、容量瓶中，用乙膳泄容到刻度。3、设定气相色谱参数：进样口：气化温度：250°C,分流比：10:1；色谱柱：流速：2.0ml/min；柱温箱：120°C（保持lmin）,10°C/min升到200°C；检测器：基座温度250°C,H2：45ml/min,Air：450ml/min,N2：40ml/mino保存。4、进样：以以上方法测定标样及未知样，记录实验数据（保留吋间及峰面积）。5、做出内标标准曲线，以内标法计算未知样屮蘑菇醇含量。【注意事项】1、配制溶液时要注意不要将溶液滴到容量瓶外面，否则会大大影响测量的结果；

6、移液枪的使用要规范，每种溶液用各自的枪头。2、GC中手动进样技术的熟练与否，直接影响到分析结果的好坏，正确的进样手法是：取样后，一手持注射器（防止气化室的高气压将针芯吹出），另一只手保护针尖（防止插入隔垫时弯曲）。先小心地将注射针头穿过隔垫，随即快速将注射器插到底，并将样品轻轻注入气化室（注意不要用力过猛使针芯弯曲），同时按start键，拔出注射器，注射样品所用时间及注射器在气化室中停留的时间越短越好。2、在进多个不同样品时，每次进样前都要将进样针润洗干净，确保洗针溶剂不干扰样品检测。在测定标样以绘制标准曲线时，由

7、于进样的浓度是梯度升高的，在测定前只用每次的待测液润洗即可。若先进高浓度溶液样品再进低浓度溶液样品则还得用溶液（乙月青）洗净。【数据处理与实验结果分析】1、试剂浓度与测量数据：蘑菇醇储备样10.107mg/ml；内标物10.140mg/mlot内标Sin)t蘑菇醇（min）A蘑菇醇人内标A蘑姑醇/人内标c蘑姑醇/°内标标样11.72.2546.81105.60.49460.4984标样21.82.21093.31012.11.08020.9967标样31.82.2149&89681.54831.4951标样41.8

8、2.22235.31082.92.06421.9935标样51.82.2273&41053.42.59962.4919未知物1.82.2665.510390.6405表1标样与未知物保留时间与峰面积数据msxAxfsi2、内标法：由Xj=吋A'xlOO"可知，以c蘑菇醇/c内标横坐标，为A蘑菇醇/A内标纵坐标作S内标法曲线，曲线拟合如下：■内标工作曲线Lin