高级生化2018年版本缩印

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1、一.蛋白质的结构与功能氮(N)16%凯氏定氮依据酸性氨基酸：天冬氨酸Asp,谷氨酸Glu碱性氨基酸：赖氨酸Lys,精氨酸Arg,组氨酸His(1)脂肪族氨基酸Gly、Ala、Vai、Leu、lie、Ser、Thr、Cys、Met、Asp、Glu^Asn、Gln^Lys、Arg(2)芳香族(苯环)氨基酸Phe、Tyr、Trp(呵喙环)(3)杂环类氨基酸His、Pro肽键(peptidebond)是由一个氨基酸的■竣基与另一个氨基酸的-氨基脱水缩合而形成的化学键。两个氨基酸脱去一个水分子形成二肽(dipeptide),若有多个氨基酸串在一起则

2、为多肽(polypeptide)传统氨基酸测序法直接测泄多肽链上的氨基酸种类;许多化学反应(如Edmandegradation)可由蛋白质的N-端开始，依次切下一个氨基酸，再测定每轮切下的氨基酸,即可推得此蛋白的氨基酸序列；若责白质太长，则无法有效测定后而的氨基酸序列；要先用蛋白质水解酶把目标蛋白质切成小肽段，各小肽段分别测序，然后再组合成长链;为了排列上述各小段多肽的先后次序，要使用两种不同的蛋白质水解酶，得到两套不同长短的多肽，分别测序后，比较各片段重柱部分，即可判断肽段先后次序。1•末端分析：每条多肽链都有一个N■末端残基和一个C・

3、末端残基。对末端残基进行分析能够确定多肽链的数量。★N端分析★DNS-cl(丹磺酰氯)法：DNS■多肽水解后的DNS•氨基酸，在紫外光激发下产生黄色荧光，灵敏度极高。2.二硫键拆开：拆开多肽链之间或链内的二硫键。获得伸展的肽链以利于后续的反应。3.氨基酸组成分析：酸水解的同时辅以碱水解。确定肽链中各种氨呈酸出现的频率，便于选择裂解方法及试剂。4.肽碎片的氨基酸顺序测定：Edman法(1)耦联PITC+H2N—A-B-C-DPH8—9.40C>PTC—A-B-C-D(2)裂解无水三氟乙酸(TFA)ATZ-A+H2N—B-C-D(3)转化PT

4、H—APITC:苯异硫氨酸酯PTC肽：苯氨基硫甲酰肽ATZ：曝卩坐咻酮苯胺；ATZ—氨基酸PTH：苯乙内酰硫腺；PTH—氨基酸肽段拼接成肽链：重叠法确能序列；二硫键的确定(对角线电泳法)：酶水解，分离出二硫键交联的肽碎片，拆开二硫键，测定每个含Cys的肽碎片的氨基酸顺序；再把肽碎片顺序与整个肽链顺序比较，即可确定二硫键的位置。稳定蛋白质空间结构的作用力：是一些所谓弱的相互作用或称非共价键或次级键，包括氢键、范德华力、疏水作用和离子键(盐键)。次级键都是非共价键，易受环境中pH、温度、离子强度等的影响，有变动的可能性。维持蛋白质二级、三级和

5、四级结构的化学键主要是氢键、范德华力和疏水作用，在某些蛋白分子中，离子键、二硫键也参与维持蛋白质的空间结构。一级结构(primarystructure)肽键和二硫键都是共价键一共价结构二三四高级结构二级结构(secondarystructure)©键三级结构(tertiarystructure)离子键、疏水作用力范德华力、氢键四级结构(quaternary)离子键、疏水作用力、范德华力、氢键氢键(hydrogenbond)：N-H---0或是0-H・・・0,虚线代表氢键，氢与N、0、Cl、F之类体积小、电子亲和力大的原子形成共价键，氢附近

6、电子云密度小而略成正电性，这一带正电荷的氢核遇到另一个电负性强的原子时，就产生静电吸引，即所谓氢键。肽单元《也叫肽平面》参与肽键的6个原子C］、C、0、N、H、C2位于同一平面，同一平面上的6个原子构成了所谓的肽单元(peptideunit)。rfl于肽键具有双键特性，所以主链中只有两个单键可以旋转。氨基酸残基(residue)：肽链中的氨基酸分子因为脱水缩合而基团不全。蛋白质二级结构的主要形式a•螺旋(a・helix丿多个肽键平面通过。•碳原子旋转，相互Z间紧密盘曲成稳固的右手螺旋。山于这种结构可以产生许多氢键，所以是一种相当稳定的结构

7、。最常见的螺旋称为a•螺旋，n=3・6残基/每圈，螺距p=0.54nmo侧链向外排布以减少空间障碍，长度为4・50个残基，平均为12个残基。折叠(P-pleatedsheet/b-sheet的b表示这是第二种规则的二级结构，呈现折板状，如同a螺旋，依靠两条肽链或一条肽链内的两段肽链间的C=0与H形成氢键，使构象稳定。b•折叠并不一定要在一级结构(序列)上连续，而是各片段可以来自不同的一级结构区，而且相对于a■螺旋的紧密结构，b・折叠是完全伸展的。B■转角(P-turn)无规卷曲(randomcoil)超二级结构浒多球蛋白中，a・helix

8、或P-sheet二级结构可以形成所谓的超二级结构，在不同的蛋白质中重复出现。超二级结构的单位有aa,bb,bab,b曲折和希腊钥匙拓扑结构。超二级结构的形成主要是氨基酸残基侧链基团间相互作用的