罗格列酮对髂动脉球囊损伤兔血管内皮的保护作用

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1、罗格列酮对髂动脉球囊损伤兔血管内皮的保护作用广州军区武汉总医院心内科丁世芳曹选超卢青研究背景经皮冠状动脉腔内成形术（percutaneoustransluminalcoronaryangioplasty，PTCA）SMC过度增殖迁移血管内皮损伤血管负性重塑炎症细胞激活血管弹性回缩血栓形成、机化再狭窄影响PTCA术后再狭窄重要因素血管内皮损伤平滑肌细胞的过度增殖、迁移脂肪组织：内分泌器官？分泌多种物质，如纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)、瘦素、肿瘤坏死因子-a、抵抗素及脂联素(adiponectin，APN)等改善胰岛素抵抗、调节脂肪代谢、防止动脉粥样硬化等方面

2、有着重要作用脂联素也被称为apM1、Acrp30或AdipoQ，是一种脂肪细胞特异的细胞因子脂联素(adiponectinAPN)生物学作用抗AS抗炎抗氧化胰岛素增敏噻唑烷二酮类(TZDs)药物是高选择性过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）γ激动剂，是治疗2型糖尿病的一类新药该类药物与体内受体结合后激活，从而改善2型糖尿病患者的胰岛素抵抗、高胰岛素血症和高糖血症代谢紊乱罗格列酮就是其中有代表性的一种改善2型糖尿病患者的胰岛素抵抗、改善高胰岛素血症和高糖血症代谢紊乱调节脂质代谢紊乱抑制过度的炎症反应抗动脉粥样硬化肾脏保护作用研究目的罗格列酮(ROS)脂联素(APN)内

3、膜增殖再狭窄（RS）实验设计罗格列酮对髂动脉球囊损伤兔血管内皮的保护作用随机分组模型制备血清学指标病理形态学研究内容1.实验动物及分组手术对照组1仅行右侧股动脉结扎术，普通饮食喂养2高脂饮食喂养8周后，行右侧髂动脉球囊内膜剥脱术模型组3高脂饮食8周+右侧髂动脉球囊内膜剥脱术+术前3天罗格列酮（2mg1/日）罗格列酮组2.兔腹-髂动脉血管内膜损伤模型制作麻醉—速麻安肌肉注射右侧膝上大腿内侧股动脉搏动最明显处纵行切开皮肤，钝性分离皮下组织及肌肉股动脉、股静脉、股神经游离完毕股动脉远端结扎，近端用无创血管夹暂时夹闭阻断血流用眼科剪在结扎动脉上方作一个45度切口，直接插入冠

4、脉球囊导管，深度约12-15cm，达髂动脉分叉水平以6～8个大气压充盈动脉球囊，将充气球囊沿髂动脉上下牵拉5-8cm至股动脉近端，反复3次，充分剥离髂动脉内膜术后以医用活力碘消毒手术伤口，肌注青霉素80万单位抗感染，连续3天模型制备所用的球囊和压力泵3.血生化标本的采集和测定于实验初和术后1、4周末采测血糖（FPG）、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和超敏C反应蛋白（hs-CRP）的含量ELISA法测定血浆中脂联素的表达水平4.病理形态学观察术后1、4周末处死各组动物，游离腹主动脉并逆行分离至髂总动

5、脉和股动脉，以左、右髂动脉分叉点为参照，依次留取病理标本各1～2cm，固定切片，分组编号HE染色及弹力纤维染色观察受损血管组织形态学改变，利用图像分析软件，进行新生内膜面积、中膜面积及内膜增殖指数等分析5.免疫组化及细胞凋亡检测免疫组化（SABC法）烤片，脱蜡，水化→封闭内源性过氧化物酶→热修复抗原→BSA封闭→滴加一抗→滴加二抗→滴加SABC→DAB显色→苏木素复染→脱水，透明，封固阳性表达分析：每份标本分别选取5个高倍视野（×400倍），染色完成后在光镜下观察结果，以细胞浆内棕黄色粗大颗粒为阳性。HPAIS1000高清晰度彩色病理图像分析系统采集图像，Image-

6、ProPlusversion6.0软件对图像进行分析。细胞凋亡检测（TUNEL法）19烤片，脱蜡，水化→封闭内源性过氧化物酶→蛋白酶消化→标记缓冲液→滴加生物素化地高辛抗体→滴加SABC→DAB显色→苏木素复染→脱水，透明，封固阳性表达分析：每份标本分别选取5个高倍视野（×400倍），染色完成后在光镜下观察结果，细胞核中有棕黄色颗粒者为阳性细胞。计算细胞凋亡的阳性率=（阳性细胞数/观察细胞总数）×100%6.统计分析以SPSS13.0统计软件包进行分析，计量资料用均数±标准差表示，两组资料间的比较采用t检验，多组间差异的显著性比较用方差分析，P<0.05有统计学意义制

7、表、摄片描述实验结果组别时间FPGTCTGHDL-CLDL-C正常对照组08.44±0.401.43±0.090.73±0.130.91±0.140.71±0.0818.29±0.341.37±0.630.69±0.130.86±0.160.68±0.3448.26±0.451.41±0.290.74±0.140.88±0.130.74±0.09模型组08.41±0.461.38±0.070.81±0.200.92±0.150.69±0.0918.33±0.4228.71±1.72b1.08±0.25b0.87±0.1418.32±0.92b48.3