感染病学基础-病原学诊断-2016-8-30

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1、病原学诊断Diagnosticmicrobiology内容Contents1.早期发展简史2.显微镜术(Microscopy)3.体外培养(Invitroculture)4.分子诊断(moleculardiagnosis)5.血清学诊断(serologicdiagnosis)6.动物实验(animalexperiment)1674，AntonyVanLeeuwenhoek借助自制透镜发现微小生物体1859,LouisPasteur制备液体培养基1881,Koch和Hesse制备固体培养基1949,JohnFranklinEnde

2、rs建立动物细胞培养技术……1.早期发展简史（1）目的：直接检测微生物（细菌、真菌、寄生虫虫卵幼虫和成虫、感染的细胞中的病毒包涵体）;初步或明确鉴定微生物2.显微镜术(Microscopy)初步鉴定：多数细菌明确鉴定：真菌和寄生虫；促进明确鉴定：荧光抗体或其它标记物染色后，显微镜观察（2）技术：普通光学显微镜术(Brightfieldorlightmicroscopy)暗视野显微镜术(Darkfieldmicroscopy)荧光显微镜术(Fluorescentmicroscopy)相差显微镜术(Phase-contrastmic

3、roscopy)电子显微镜术（Electronmicroscopy)普通光学显微镜术(Brightfieldorlightmicroscopy)：细菌染色标本活菌运动大的微生物如寄生虫和真菌病毒感染的病变细胞和包涵体组织病理暗视野显微镜术(Darkfieldmicroscopy)：不染色活菌螺旋体及其动力荧光显微镜术(Fluorescentmicroscopy)：各种微生物用荧光素标记后发出荧光相差显微镜术(Phase-contrastmicroscopy)：可观察到微生物的内部结构电子显微镜术（Electronmicrosco

4、py)：常用做研究工具直接观察到高浓度液体中的病毒颗粒的形态和大小、低浓度液体可离心后收集沉淀观察或免疫电镜观察微生物的超微结构（3）检查方法：直接检查（directexamination)鉴别染色（differentialstains，eg.Gramstain)抗酸染色（acid-faststains)荧光染色（fluorescentstains)（1）成功取决于：微生物的生物学特性感染的部位患者对感染的免疫反应适宜培养基（三种类型）和条件3.体外培养(Invitroculture)培养基类型（细菌和真菌）培养基类型（衣原体、

5、立克次体和全部病毒）：细胞培养（1）分子种类：DNARNA蛋白质（2）优势：适宜于不能分离或免疫学检查的微生物检查；检测基因型或突变（eg.耐药）敏感、特异和安全；4.分子诊断(moleculardiagnosis)Restrictionfragmentlengthpolymorphism（RFLP，限制性片段长度多态性）distinctionofDNAfrombacterialstrainsseparatedbypulsed-fieldgelelectrophoresis.Lanes1to3showSma1restrictio

6、nendonuclease-digestedDNAfrombacteriafromtwofamilymemberswithnecrotizingfasciitisandfromtheirphysician(pharyngitis).Lanes4to6arefromunrelatedStreptococcuspyogenesstrainsDNAprobe（DNA探针）analysisofvirus-infectedcells.Suchcellscanbelocalizedinhistologicallypreparedtissue

7、sectionsusingDNAprobesconsistingofasfewasninenucleotidesorbacterialplasmidscontainingtheviralgenome.AtaggedDNAprobeisaddedtothesample.Theappropriatesubstrateisaddedtocolorthenucleiofvirallyinfectedcells.Insitulocalization（原位杂交）ofcytomegalovirus(CMV)infectionusingagen

8、eticprobe.CMVinfectionoftherenaltubulesofakidneyislocalizedwithabiotin-labeled,CMV-specificDNAprobeandisvisualizedbymeansofthehorse