肺动脉高压中TGF-β1和PPAR-γ调控ET-1表达的分子机制研究

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1、暨南大学博士学位论文题名（中英对照）：肺动脉高压中TGF-β1和PPAR-γ调控ET-1表达的分子机制研究TheMolecularmechanismforET-1expressionregulatedbyTGF-β1andPPAR-γinPulmonaryhypertension作者姓名：向淑麟（同等学力申请）指导教师姓名廖品琥及学位、职称：博士、教授学科、专业名称：急诊医学学位类型：专业学位论文提交日期：2017年04月18日论文答辩日期：2017年06月09日答辩委员会主席：钟小宁教授论文评阅人：学位授予单位和日期：暨南大学万方数据暨南大学博士学位论

2、文肺动脉高压中TGF-β1和PPAR-γ调控ET-1表达的分子机制研究独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得暨南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解暨南大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允

3、许论文被查阅和借阅。本人授权暨南大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日学位论文作者毕业后去向：工作单位：广西壮族自治区人民医院电话：13978677627通讯地址：广西南宁市桃源路6号邮编：5300212万方数据暨南大学博士学位论文肺动脉高压中TGF-β1和PPAR-γ调控ET-1表达的分子机制研究肺动脉高压中TGF-β1和PPAR-γ调控ET-1表达的分子机制研究中文摘要研究背景：肺

4、动脉高压（Pulmonaryhypertension，PH）是指肺血管阻力持续增高超过一定界值的病理生理状态，可导致右心衰竭而危及生命。目前普遍认为PH的病理生理机制主要涉及血管收缩、细胞增殖、血管重塑、血栓形成和血管内皮损伤，多种因素的综合作用使肺血管压力进行性升高，最终导致右心功能衰竭和死亡，临床治疗效果不佳，发病机制不明。ET-1与肺血管重塑及肺动脉压力增高密切相关，然而具体的分子机制仍不清楚。已有研究表明ET-1、TGF-β1及PPAR-γ均参与了PH的病理发生及发展过程，PPAR-γ信号转导、MAPK及Smad信号通道激活以及ET-1高表达可能

5、是肺动脉高压的病理生理基础，其具体机制及信号转导通路至今尚未完全明确，值得进一步研究。目的：通过检测ET-1、TGF-β1在PH患者血液中的表达水平、PPAR-γ在PH患者肺组织中的表达水平、TGF-β1对A549细胞表达ET-1的影响及其细胞信号转导机制、PPAR-γ对TGF-β1刺激A549细胞表达ET-1的影响及其细胞信号转导机制等研究，以阐明在A549细胞中TGF-β1及PPAR-γ对ET-1表达调控的分子机制。方法：第一部分：根据患者病史、临床症状及超声心动图结果选取47例PH患者，采用ELISA检测患者血清中ET-1及TGF-β1蛋白的表达水

6、平；选取PH患者肺组织8例，通过免疫组织化学染色法研究PPAR-γ在PH患者肺组织的定位和表达及其临床意义。第二部分：根据临床研究的结果，在细胞水平上，研究TGF-β1、PPAR-γ对ET-1表达的影响，深入研究其分子调控机制。1.选择A549细胞，用TGF-β1刺激A549细胞后，通过qRT-PCR和ELISA检测ET-1的mRNA及蛋白表达水平，通过Westernblot检测MAPK（磷酸化p38）、JNK/SAPK和NFκB（磷酸化p65，p50亚基）等信号通道的激活情况，结合使用p38激酶抑制剂SB203580等信号通道选择性抑制剂研究参与ET-

7、1释放的主要信号转导途径。2.采用RNA干扰技术沉默PPAR-γ基因并转染A549细胞，另用PPAR-γ的抑制剂S2871作用于I万方数据暨南大学博士学位论文肺动脉高压中TGF-β1和PPAR-γ调控ET-1表达的分子机制研究A549细胞，通过ELISA和qRT-PCR检测沉默了PPAR-γ基因及加入抑制剂S2871后的A549细胞ET-1蛋白和mRNA表达水平有何差异；构建含PPAR-γ基因的质粒并转染A549细胞，另用PPAR-γ的激动剂S2505作用于A549细胞，通过ELISA和qRT-PCR检测其在TGF-β1刺激作用下的ET-1分泌情况；采用

8、Westernblot检测研究PPAR-γ在TGF-β1刺激A549细胞释放ET