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《人参单体皂甙Rh2对前列腺癌细胞株PC-3M》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、人参单体皂甙Rh2对前列腺癌细胞株PC-3M细胞移行周期的影响[摘 要] 目的:探讨Rh2对体外培养的PC-3M细胞移行周期的影响。方法:应用[3H]-TdR掺入法和流式细胞仪测定DNA含量及进行细胞周期的分析。结果:PC-3M细胞的[3H]-TdR掺入量明显少于对照组(P<0·01);流式细胞仪测定G1期细胞数百分比明显高于对照组。结论:Rh2可使PC-3M细胞增殖周期阻滞在G1期,肿瘤细胞增殖减慢。[关键词] 前列腺肿瘤;人参;细胞周期随着我国老年人口的增加及临床医学诊断技术的提高,在我国前列腺癌的发病率也有逐年上升的趋势。而对前列腺癌的治疗一直
2、未取得满意的效果。现代医学研究发现单体人参皂甙Rh2具有较强的抗肿瘤生物活性,对黑色素瘤、卵巢癌等肿瘤细胞的生长具有抑制作用。但Rh2对前列腺癌的作用尚未见文献报道。前期研究工作发现Rh2可明显抑制PC-3M细胞的生长。本文拟用[3H]-TdR掺入法和流式细胞术观察Rh2对PC-3M细胞移行周期的影响。材料和方法1 细胞株及培养条件PC-3M细胞株系人激素非依赖性前列腺癌细胞株。细胞培养在含有10%小牛血清的IMDM培养液中,传代用0.25%的胰酶消化后分瓶,每周传代2次。2 药品与试剂 人参单体皂甙Rh2为本校药学院天然药物化学教研室分离提纯,并
3、制成试剂,浓度为20g/L。用时以PBS溶液稀释。[3H]-TdR购于中国科学院上海原子核研究所。RNA酶为BochringerMannheim产品,碘化丙锭(propidiumiodide,PI)为美国Sigma公司产品。3 方法3.1[3H]-TdR掺入实验([3H]-TdRincorporationassay) 细胞接种于96孔无菌培养板,每孔10μL,细胞数1×104/孔。实验组加不同浓度Rh2PBS溶液,对照组加PBS溶液,终体积为200μL,每组设4复孔。置37℃、5%CO2孵箱中培养24h,于结束培养6-8h前加入[3H]-TdR,每孔
4、5μL(3·7×107Bq/L)。培养结束时,取出培养板,弃掉培养液,Hanks液洗3次,胰酶消化后,加培养液中止消化,收集细胞于玻纤滤纸上,用液闪仪测定counts·min-1值,即用counts·min-1值表示[3H]-TdR的掺入量。3.2 流式细胞术(flowcytometry,FCM)①细胞培养及固定 传代培养的细胞经0.25%胰酶消化后,计数,台盼蓝拒染法测得活细胞数为90%以上。将细胞接种于培养瓶中,每瓶5×106个细胞,同时加药,Rh2的终浓度为5、10mg/L,对照组加等体积PBS。每瓶终体积为4mL。作用24h后,收集细胞,离心
5、,留肿瘤细胞悬液0.5~1mL,加3mLpH7.4的磷酸缓冲液,离心,弃上清液,留0.5mL的细胞悬液,吹打均匀,PBS洗两次。用细滴管或注射器将以上细胞悬液迅速注入4℃、70%的冷乙醇中,搅匀。4℃冰箱固定至两周。 ②DNA染色-PI染色法 将用70%冷乙醇固定的细胞悬液离心后,弃乙醇。PBS洗两次,弃上清后留0.5mL细胞悬液,用PBS将细胞密度调整为1×109/L。加入RNAase0.5mL(5g/L),37℃消化30min。取出放入冰浴中,加入1.5mLPI(50mg/L)对DNA进行染色,30min以上。用300目尼龙网过滤,上流式细胞仪,
6、在波长488nm,300mW氩离子激光条件下,每份样品检测1×104个细胞,所得数据通过接口直接贮存在计算机上,实验后脱机进行运算,通过软件Multicycle进行分析,以DNA含量为横坐标,受检细胞数为纵坐标作图,计算得各期细胞数。4 统计学处理实验结果统计处理采用ANOVA分析,Studentt检验,数据用-x±s表示。结 果1 Rh2对肿瘤细胞DNA合成的影响 从表1可见,当用不同浓度的Rh2处理后,PC-3M细胞的[3H]-TdR掺入量明显少于对照组(P<0.01),其作用随着药物浓度的增大而增强(见表1)。2 Rh2对PC-3M细胞移行
7、周期的影响经Rh2作用后,PC-3M各期细胞数百分比如表2。从表2可见,G1期细胞数明显增多,而S期细胞数减少,G1期细胞大量堆积。同时以DNA含量为横坐标,以受检细胞数为纵坐标,可得DNA直方图。与对照组比较,Rh2给药组G1峰增高,而S、G2期峰降低,在G1峰的前面出现一个小的亚2倍体峰(亦称为亚G1峰),即为凋亡峰,从表2可以看出Rh25mg/L、10mg/L发生凋亡的百分率分别是6.8%和13.6%。明显高于对照组。讨论前列腺癌是老年男性常见肿瘤之一,目前对前列腺癌的治疗仍主要以手术切除和内分泌治疗为主。但均未取得满意的远期效果。从植物中开发
8、抗肿瘤药物,已成为国内外抗肿瘤新药开发的一个热点。夏丽娟等[3]利用体外实验证明Rh2在10mg/L的浓度下
