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《人参皂甙单体Rh2 对人K562 白血病细胞增殖和凋亡的时效》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、人参皂甙单体Rh2对人K562白血病细胞增殖和凋亡的时效和量效分析摘要目的:观察人参皂甙单体Rh2对人K562细胞增殖和凋亡的影响,分析该影响的时间和剂量依赖性。方法:实验于2006-07/08在吉林医药学院临床检验系实验室完成。①取对数生长期人K562细胞制成细胞悬液,浓度1×108L-1,接种于96孔培养板内,每孔100μL,6h后加入终质量浓度分别为6.25,12.5,25.0,50.0,100.0mg/L的人参皂甙单体Rh2100μL(购自吉林省宏久生物科技股份有限公司),每一浓度组均设4孔。对照孔及调零孔加100μL培养液。各孔总体积均
2、为200μL。在加药后48h采用四甲基偶氮比色法检测各孔中细胞的抑制率。在接近于半数抑郁浓度的人参皂甙单体Rh2处理作用于细胞6,12,24,48和72h后采用四甲基偶氮唑盐比色法计算抑制率。②在倒置显微镜下观察加药与未加药孔K562细胞形态。③常规苏木精-伊红染色,检测25.0mg/L人参皂甙单体Rh2作用0,12,24和48h后K562细胞的凋亡率,并观察人参皂甙单体Rh2质量浓度分别为0,12.5,25.0,50.0,100.0mg/L时,培养24h后的细胞凋亡率。结果:①人参皂甙单体Rh2对K562细胞生长抑制作用:当人参皂甙单体Rh2质
3、量浓度为6.25,12.5,25.0,50.0和100.0mg/L时,抑制率逐渐升高,呈现明显剂量依赖性。人参皂甙单体Rh2对K562细胞的半数抑制浓度为25.8mg/L,处理K562细胞6,12,24,48,72h后细胞抑制率逐渐升高,且后4个时间点明显高于处理6h时(t=11.79～50.89,P<0.01)。②人参皂甙单体Rh2对K562细胞形态的影响:细胞经人参皂甙单体Rh2作用后呈现出明显的凋亡细胞形态,细胞分散,体积缩小,胞浆浓缩,细胞核膜消失,细胞核断裂呈小块或碎片状,但细胞膜较完整并可见凋亡小体。③人参皂甙单体Rh2对K562细胞
4、凋亡的影响:在25.0mg/L人参皂甙单体Rh2作用K562细胞0,12,24和48h后,K562细胞的凋亡率依次升高,分别为(3.8±0.5)%,(9.4±1.1)%,(23.2±2.2)%和(34.5±3.5)%(与作用0h比较,t=8.78～20.06,P<0.05～0.01)。人参皂甙单体Rh2质量浓度分别为0,12.5,25.0,50.0,100.0mg/L培养K562细胞24h,细胞凋亡率依次升高,分别为[(3.7±0.6)%,(9.4±1.3)%,(21.2±2.1)%,(28.5±2.5)%,(31.8±3.4)%,与0mg/L人
5、参皂甙单体比较,t=9.39～18.54,P<0.01]。结论:人参皂甙单体Rh2能抑制体外培养的K562细胞增殖并诱导其凋亡,且呈时间和剂量依赖性。主题词:人参皂甙/药理学;K562细胞/药物作用;细胞凋亡;细胞,培养的0引言现代医学研究表明,中药人参具有抗肿瘤、抗衰老、抗辐射等多种生物活性作用,其主要活性成分人参皂甙能诱导肿瘤细胞分化和凋亡而发挥抗肿瘤作用。人参皂甙单体Rh2是一种原人参三醇型皂甙,是红参的主要抗癌成分。作者以人红白血病K562细胞株为受试对象,研究人参皂甙单体Rh2对K562细胞增殖和凋亡的影响,为进一步阐明人参皂甙单体抗白
6、血病作用的机制,从而为其应用于白血病的临床治疗提供更多的实验依据。1材料和方法设计:观察对比实验。单位:吉林医药学院临床检验教研室。材料:实验于2006-07/08在吉林医药学院临床检验系实验室完成。人红白血病K562细胞株(购自中国科学院上海生物细胞研究所);人参皂甙单体Rh2(购自吉林省宏久生物科技股份有限公司),溶于PBS(pH7.4)中配成50g/L母液,超滤除菌,-20℃保存;RPMI-1640培养基(购于美国Gibco公司);小牛血清(FBS)(杭州四季青生物工程公司产品)。仪器:超净工作台(哈尔滨市东联电子技术开发有限公司)、CO2
7、培养箱(上海易亮医疗器械有限公司)、96孔细胞培养板(广州展晨生物科技有限公司)、倒置显微镜、酶联免疫检测仪等。设计、实施、评估者:设计为第一作者,干预实施为第一、二作者,评估为第三、四作者,均受过专业培训,采用盲法评估。方法：细胞培养:K562细胞用含120g/L小牛血清的培养液(含1×105IU/L青霉素和0.1g/L链霉素),于37℃,体积分数0.05CO2恒温培养箱中培养,细胞呈悬浮生长,达80%左右时传代。药物处理:细胞传代后,接种于96孔培养板内,当细胞为50%～60%时,换用含有不同浓度人参皂甙单体Rh2的培养液。培养至预定时间后进
8、行观测。观察人参皂甙单体Rh2对细胞生长的抑制作用:取对数生长期细胞制成细胞悬液,浓度1×105L-1,接种于96孔培养板内,每孔100
