产蛋白酶菌株的筛选与酶活力的测定【文献综述】

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1、毕业设计文献综述生物科学产蛋白酶菌株的筛选与酶活力的测定摘要[摘要]本文主要按照实验设计步骤从海水中筛选出可以产蛋白酶的放线菌，并对获得的放线菌进行初步研究，如形态观察以及酶活力的测定。从舟山沿海中分离得到几株产蛋白酶的放线菌，并通过酪蛋白平板培养基，水解酪蛋白试验可对菌株的产酶情况进行定性研究，酶活较高的菌株都能产生较大的水解圈。对其中2株产酶活性较高的菌株进行了以酪蛋白为底物的紫外分光光度法进行酶活性的测定。[关键词]：蛋白酶；分离纯化；透明圈；酶活力1蛋白酶的简介水解蛋白质肽键的一类酶的总称。按其水解多肽的方式，可以将其分为内肽酶和外肽酶两类。内肽酶将蛋白质分子内部切断，形成分子

2、量较小的肽。外肽酶从蛋白质分子的游离氨基或羧基的末端逐个将肽键水解，而游离出氨基酸，前者为氨基肽酶后者为羧基肽酶[1]。按其活性中心和最适pH值，又可将蛋白酶分为丝氨酸蛋白酶、巯基蛋白酶、金属蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶。按其反应的最适pH值，分为酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶。工业生产上应用的蛋白酶，主要是内肽酶。根据蛋白酶对所作用的反应底物的选择性，一种蛋白酶仅能作用于蛋白质分子中一定的肽键。种类很多，重要的有胃蛋白酶、胰蛋白酶、组织蛋白酶、木瓜蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶等。如胰蛋白酶催化水解碱性氨基酸所形成的肽键。2蛋白酶的广泛应用蛋白酶广泛存在于动物内脏、植物茎叶、果实和微生物中。微

3、生物蛋白酶，主要由霉菌、细菌，其次由酵母、放线菌生产。例如，乳酸菌(lacticacidbacteria,LAB)是一大类能在可利用的碳水化合物发酵过程中产生大量乳酸的细菌，目前已知有200多种LAB[2]。相当多的LAB是益生菌，其作为益生菌有如下依据：其属于肠道正常菌群，对人和动物的健康是有益的[3]4。在农业、兽医、医学以及食品工业[4、5]中是很重要的。如果对产蛋白酶的乳酸菌种进行了筛选，并将所产的蛋白酶进行了分离纯化，就可以为酸奶的生产研制和微生态制剂的研发提供更优良的菌种。由于动植物资源有限，工业上可以利用枯草杆菌、栖土曲霉等微生物发酵制备蛋白酶制剂。蛋白酶已广泛应用在皮革

4、、毛皮、丝绸、医药、食品、酿造等方面。皮革工业[6]的脱毛和软化已大量利用蛋白酶，既节省时间，又改善劳动卫生条件。蛋白酶还可用于蚕丝脱胶、肉类嫩化、酒类澄清。临床上可作药用，如用胃蛋白酶治疗消化不良，用酸性蛋白酶治疗支气管炎，用弹性蛋白酶治疗脉管炎以及用胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶对外科化脓性创口的净化及胸腔间浆膜粘连的治疗。加酶洗衣粉是洗涤剂中的新产品，含碱性蛋白酶，能去除衣物上的血渍和蛋白污物，但使用时注意不要接触皮肤，以免损伤皮肤表面的蛋白质，引起皮疹、湿疹等过敏现象。微生物产生的弹性蛋白酶(Elastase)是一种肽链内切酶[7]，以分解不溶性弹性蛋白为特征，弹性蛋白酶可应用于医疗卫

5、生及食品加工及日用化学业。食品工业方面，弹性蛋白酶可用来进行农副产品的深加工，制作高蛋白食品。弹性蛋白酶可专一降解坚韧的韧带、大动脉血管、筋腱等的结缔组织，可作为理想的肉类嫩化剂，代替目前广泛使用的木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶[8]。饲料中的蛋白需经蛋白酶和肽酶降解成肽和氨基酸后才能被畜禽利用，有些抗营养因子能防碍蛋白质的消化，如生大豆及其饼粕中含有的胰蛋白酶抑制剂和植物凝集素能降低胰蛋白酶及胰凝乳蛋白酶的活性并引起胰腺的肥大，导致饲料蛋白质和能量的利用率降低。单胃动物本身能够分泌蛋白酶，但幼禽幼畜消化机能尚未发育完全，蛋白酶分泌量不足。在幼禽幼兽日粮中添加外源蛋白酶不但能补充体内内源酶的不

6、足，而且能激活内源酶的分泌，将蛋白质分解成多肽、寡肽、氨基酸等，因而有利于畜禽对蛋白质的消化分解和吸收利用。4水产饲料需含有较高含量的蛋白质，才能满足水产类动物的营养需求，而鱼类肠道为中性或微碱性环境，适用的酶制剂应考虑最佳酶活的pH值在中性和偏碱性的酶种，而且应该是高酶活、高剂量，以适应鱼类消化道短的生理特点。相对国外酶制剂活性来说，国产酶制剂活性很低。酶制剂活性的提高，关键靠技术进步，选择适合的菌种。产品酶活大幅度的提高，必将会降低成本，从而促进酶制剂在我国大规模的推广与应用。酶制剂已成为皮革生产过程中及清洁化制革工艺中不可缺少的一类材料。酶制剂在制革过程的应用主要体现在制革的准备

7、工段，准备工段中各工序的处理对象主要是各种蛋白质（如胶原蛋白、角蛋白、网硬蛋白、弹性蛋白及纤维间质中的白蛋白、球蛋白、蛋白多糖等）和脂肪等。由于酶的作用具有高效性和专一性，因此在准备工段的各工序中可以根据各工序的需要有针对性地选择酶制剂，在较小的用量下达到理想的效果，减少有害物质的使用，缩短处理时间，提高成革的质量。根据制革各工序的要求，人们选择不同的蛋白酶并辅以其他酶和特殊助剂，开发了一系列的制革用酶制剂产品。目前市场上的制革用酶制剂，根据它