产淀粉酶海洋放线菌的筛选与诱变选育【毕业论文】

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1、目录本科毕业论文(20届)产淀粉酶海洋放线菌的筛选与诱变选育专业:生物科学目录目录摘要IAbstractII引言11材料与方法31.1材料31.1.1仪器与设备31.1.2药品与试剂31.1.3培养基31.1.4诱变源41.2实验方法41.2.1采样及处理41.2.2菌株的分离培养41.2.3初步定向筛选41.2.4保种41.2.5摇瓶复筛51.2.6酶活力测定51.2.7菌悬液的制备61.2.8物理诱变61.2.9原生质体的制备61.2.10原生质体融合61.2.11原生质体再生71.2.12粗酶特征初步分析72实验结果与分析82.1产淀

2、粉酶放线菌的筛选82.2产淀粉酶菌株的诱变82.3粗酶特征初步分析9目录3讨论123.1诱变方式的选择123.2粗酶特征变量选择13小结14参考文献15致谢17中文摘要摘要[摘要]【目的】通过合适的诱变方法,选育出一株海洋来源产淀粉酶能力显著提高的菌株。【方法】从浙江舟山附近海域进行多层次取样,利用鉴定培养基观察水解圈大小,比较透明圈直径(C)和菌落直径(H)的比值,初步筛选产淀粉酶的放线菌。用YOO改良法测定酶活力,复筛产酶能力强的菌株作为出发菌株,通过紫外线、水浴热处理和超声波3种物理诱变方式以及原生质体融合技术选育高产淀粉酶菌株。探究

3、了突变株粗酶液在不同温度、pH、Ca2+浓度下的酶活力变化。【结果】从海泥、海水和海藻中分离到产淀粉酶的放线菌43株,取其中产酶能力最高的3株中的一株,编号为A19,其初始酶活力为46.5u/mL。经诱变选育,发现在15W紫外线,照距30cm,照射时间30s和功率150W超声波处理45min时,酶活力最高,同为111.7u/mL,提高140.21%。突变株粗酶液在pH6.0时活性最高,在pH7.5时存在一个峰值;经30℃处理后酶活较高,在60℃、70℃时有失活趋势;0.03mol/LCa2+处理后,酶活力显著提高。[关键词]淀粉酶;放线菌;

4、筛选;诱变15英文摘要Abstract[Abstract][Objective]Tobreedastrainofmarinewhoseamylaseproductioncapacityremarkablyimprovedbyappropriatemutagenesismethod.[Method]Multi-levelsamplingweretakenfromwatersnearZhoushaninZhejiangProvince.Maketheuseofidentifyingmediumtoobservehydrolysiscycle,c

5、omparetheratioofthediameteroftransparentcircle(C)andthediameterofthebacterialcolony(H),preliminaryscreenactinomyceteswhichcouldproduceamylase.MaketheuseofYooimprovedmethodtoisolatethevitalityofenzyme,rescreenstrainandsortoutsomegoodstrainwithstrongabilityofproducingenzymew

6、hichwillbestartingstrain.UV,waterbathandultrasonicwavethese3physicalmutagenesismethodsandthetechnologyofprotoplastfusionweretakentobreedstrainwithhigh-producingenzyme.Exploredthevariationofmutantcrudeenzymeatdifferenttemperatures,pHandCa2+concentration.[Outcome]43actinomyc

7、etesthatcanproduceamylasehaveisolatedfrommarinemud,seawaterandalgae.Iadopt1from3strainswhichhavethebestcapacityofproducingenzyme,tagitasA19,anditsinitialenzymevitalityis46.5u/mL.Breedingbymutagenesis,wefoundthatthevitalityofenzymestoodatthepeakifitstayedinacertainenvironme

8、ntwith15WUV,ofadistanceof30cm,exposuretime30sandsonicationpowered150Wdealingwithfor45minu

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