凝血分析方法

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1、血凝仪的基木测试原理日前可开展的血栓/止血成份检测的主要方法有凝固法、底物显色法、免疫法、乳胶凝集法等。在表1屮可注意到，在血栓/止血检验中最常用的凝血酶原吋间（PT）、活化部分凝血活酶时间（AFTT）、纤维蛋□原（FIB）、凝血酶时间（TT）、内源凝血因子、外源凝血因子、高分子量肝索、低分子量肝素、蛋白C、蛋白S等均可用凝固法测量。所以目前半口动血凝仪基木上祁是以凝固法测量为主，而在全口动血凝仪中也一定有凝固法测量。凝固法中又可分为光学法和磁珠法两类。rtr丁•光学法儿乎可涵盖各种检测方法，为了降低仪器制造成本

2、，全自动血凝仪以光学法居多。但也有少数高级全口动血凝仪中凝固法测量采用无样品干扰的双磁路磁珠法，而其它测量采用光学法，并可同时进行检测。一、凝固法（生物物理法）凝固法是通过检测血浆在凝血激活剂作用下的一系列物理量的变化（光、电、机械运动等），山计算机分析所得数据并将Z换算成最终结果，所以也可将其称作生物物理法。1.电流法电流法利用纤维蛋白原无导电性而纤维蛋白具有导电性的特点，将待测样品作为电路的一部分，根据凝血过程中电路电流的变化來判断纤维蛋白的形成。由于该电流法的不可靠性及单一性，很快被更灵敏、更易扩展的光学法

3、所淘汰。2.光学法（比浊法）光学式血凝仪是根据凝固过程屮浊度的变化來测雄凝血的。根据不同的光学测量原理，又可分为散射比浊法和透射比浊法两类。测定项目凝固法底物显色法乳胶凝集法ELISA凝血酶原时间（PT）•活化部分凝血活酶时间（AFTT）•凝血酶时间（TT）•纤维蛋白原（FIB）•外源性凝血因子II、V、VII、X••内源性凝血因子VIII、IX、XI、XII••凝血因子VIII•肝素••低分子量肝素••抗凝血酶III(AT-III)••蛋白C（PC）•••蛋白S(PC)•••血栓调节蛋白（Thromodulin

4、）••活化蛋白C抵抗性（APC-R）•纤溶酶原（PLG）•抗纤溶酶（a2-AP）•补体1脂酶抑制物（CI）•组织纤溶酶原激活物（t・PA）••纤溶酶原激活物抑制物（PAI）••纤维蛋白单体•纤维蛋白降解产物（FDP）•■D-二聚体（D-Dimer）■•纤维蛋门肽A（FPA）•凝血酶原断片1+2（F1+2）•表1血栓/止血成份检测方法（1）散射比浊法：散射比浊法（图1）是根据待验样品在凝固过程中散射光的变化來确处检测终点的。在该方法中检测通道的单色光源与光探测器呈90。直角，当向样品屮加入凝血激活剂后，随看样品屮纤

5、维蛋白凝块的形成过程，样品的散射光强度逐步增加，仪器把这种光学变化描绘成凝固曲线，当样品完全凝固以后，散射光的强度不再变化。通常是把凝同的起始点作为0%,凝固终点作为100%,把50%作为凝固时间。光探测器接收这一光的变化，将莫转化为电信号，经过放人再被传送到监测器上进行处理，描出凝固曲线。当测定含有干扰物（高脂血症、黄疸和溶血）或低纤维蛋白原血症的特殊样本时，山于本底浊度的存在，其作为起始点0%的皋线会随Z上移或卜移，仪器在数据处理过程中用本底扣除的方法来减少了这类标木对测定的影响。但是这是以牺牲冇效信号的动态

6、范圉为代价的，对于高浊度标本并不能有效解决问题。图2透射比浊法示意图（2）透射比浊法：透射比浊法（图2）是根据待测样品在凝固过程中吸光度的变化來确处凝固终点。与散射比浊法不同的是该方法的光路同一般的比色法一•样呈玄线安排：來口光源的光线经过处理后变成平行光，透过待测样品后照射到光电管变成电信号，经过放大后在监测器处理。当向样品中加入凝血激活剂后，开始的吸光度非常弱，随着反应管中纤维蛋白凝块的形成，标本吸光度也逐渐增强，当凝块完全形成后，吸光度趋于恒定。血凝仪可以自动描记吸光度的变化并绘制Illi线，设定其中某一点

7、对应的时间为凝固时间。就浊度测量原埋而言，散射比浊法更为合埋、准确。在这类仪器中，光源、样品、接收器成直角排列，接收器得到的完全是浊度测量所需的散射光。而在透射比浊法中，光源、样品、接收器成一H线排列，接收器得到的是很强的透射光和较弱的散射光，前者是有效成份，后者应扣除，所以耍进行信号校止，并按经验公式换算到散射浊度。此法虽仪器简单，但精度较差。在上述的设计屮都是吸光度从弱变强，而有的产品设计止好和反一光度从强变弱。例如在“光电磁珠法”的设计中，在待测样木中加入具有一定浊度的试剂和一粒钢珠，钢珠在磁场的作用下起搅

8、拌作用，样本在凝固过程中产生的纤维蛋白丝不断缠绕于钢珠上，使液体反而逐渐变淸，吸光度值逐渐降低。该方法重复性好，监测范围人（可以监测结果超高和低纤维蛋白原的各种异常血浆），但是由于仍以监测吸光度变化为依据，所以无法从根木上解决溶血、高脂血症或乳糜微粒、浑浊等干扰物対检测的彫响。光学法凝血测试的优点在于灵敏度高、仪器结构简单、易于自动化，缺点是样品的光学异常、测试杯的光洁度