支原体污染相关知识

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1、治疗方法：1所以兽用的泰乐菌素2用plasmocin等抗支原体的药物有效（invivogen公司）3用巨噬细胞共培养有效（吞噬支原体）；4个人认为是胞外污染微生物通过整合素粘附介导的信号传导引起的（有初步data支持假设）。抗生素处理：如加入泰乐菌素等。共培养法：与巨噬细胞共培养。重新克隆法：抗生素处理后，将细胞稀释后传代，每周换2次含抗生素的新鲜培养液，4~5周后，重复克隆2次。过滤法：0.22µm孔径滤膜正压过滤还有人认为含DDX基序的外源多肽进入宿主细胞后，可以激活caspase3介导凋亡启动。培养过程：所以我改用corning的带滤膜透气盖的瓶子以后好多了。那个瓶子和普通盖子

2、的贵不了多少。泰乐菌素是一种兽用抗生素,常用在鸡、猪的食料辅料，可以防止支原体感染引起的支气管哮喘，至今尚未见有耐药菌株，是治疗支原体感染的特效药。第二种方法：M-Plasmocin：InvivoGen公司研究开发的新一代支原体抗生素M-Plasmocin能有效地杀灭支原体，不影响细胞本身的代谢，并且用M-Plasmocin处理过的培养细胞，不会重新感染支原体。第三种方法：用BM-Cyclin-1、2，效果很好，但方法如下：细胞传代同时加BM-Cyclin-110μg/ml，37℃培养3天，加入BM-Cyclin-25μg/ml，37℃培养3天；（不需传代，因为支原体污染的细胞生长非

3、常慢！）如果细胞生长恢复正常，即可结束。否则加BM-Cyclin-120μg/ml，37℃培养3天，加入BM-Cyclin-210μg/ml，37℃培养3天。怀疑是支原体污染的就可以试试了，对细胞不会有太大影响。第四种方法：可以用红霉素，但它不能完全根治支原体感染，停药后一段时间可以复发。第五：热灭活可以试试，41度10个小时，可以杀死支原体，是一种比较简单的方法，对细胞损伤不大。用ATCC培养基培养过的细胞污染物中，菌落大小不一。可能还有对培养基不适应的一些没有培养成功的。实际上，不仅仅是鼠支原体，还有无胆甾原体、猪鼻支原体、植原体、口腔支原体和精氨酸支原体等等，还有挑单克隆测序时

4、，还发现比对为未鉴定的支原体种类。所以，种类繁多。图片跟楼主见到的一样。我们还做过很多支原体的细胞粘附实验，其实很多支原体（体型胖的更明显）在10倍镜下就可见的。并不是很小。Hd的MycoScan支原体检测试剂盒分别检测了培养基，血清，以及细胞培养上清，PCR的结果是培养上清（+），培养基（-），血清（-）。用药典上的方法，VERO细胞染色结果跟PCR结果一致。检测支原体污染的方法有很多种，包括支原体分离培养、支原体特异酶检测、RT-PCR检测以及DNA荧光染色检测。上述检测方法中，除DNA荧光染色检测外操作步骤相对比较烦琐并且所需时间较长。本支原体染色检测试剂盒是通过Hoechst

5、染色来检测支原体的。本试剂盒的荧光染色可快速、有效、高灵敏度地检测支原体污染。invivogen公司的支原体处理试剂1：抗生素处理：分别用青链双抗，硫酸庆大霉素，四环素，环丙沙星/哌拉西林，以及支原体特效抑制剂m-plasmocin处理细胞，清楚效果不佳；2：物理方式处理，42度培养12小时，清除效果也不佳；3：坚持每天换液，换液前用含高浓度抗生素的DPBS洗涤细胞2次，吸干液体后换新鲜培养基，能够一定程度缓解污染物对细胞生长的抑制作用，但是每天换液前仍能看到大量悬浮死细胞。（附注：我们一直使用的是无菌一次性耗材，进口品牌滤盖培养瓶，Gibco公司进口1640、胰酶/EDTA，DPB

6、S等溶液，以及Hyclone公司的胎牛血清等）场上已有了新一代支原体抗生素M-Plasmocin，能有效的杀灭支原体，又不影响细胞本身的代谢，而且处理过的细胞不会重新感染支原体。另外，配合支原体检测试剂盒可以帮助尽快发现支原体的污染。使用的培养基是进口的粉末培养基，就是直接加水（我们实验室用的是三蒸水）、调pH值、过滤后就能用的那种，但是因为要经过0.22的滤膜过滤，所以水没有经过高压灭菌，而0.22的滤膜是不能阻止支原体通过的，所以这一点让我非常怀疑；胰酶是买的现成的，不存在配制时污染的问题；血清是国产的优级胎牛血清，不需灭活，不知道信不信的过？而且加到培养基之前也用滤膜过滤了，去

7、医院买一瓶静脉滴注用的”环丙沙星注射液“，国产的很便宜，在超净台内打开，可直接往培养瓶里加，混匀，终浓度为10ug/ml，细胞连续用药两周，即OK。也可试20，10，5，高中低三个浓度，慎重些。本实验室多人试过，效果很好，且一瓶静脉滴注用的”环丙沙星注射液“，稀释量很大，能用于大量大量的细胞，经济实惠，最穷的人也用的起。在无血清培养基（DMEM+15%KSR）支原体抗生素，M-Plasmocin，invivogen·价　　格：￥1480.0·1.处死孕鼠，