附子汤质量评价及治疗慢性心衰药效学研究

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1、中图分类号论文编号学科分类号密级ＳｈａｎｘｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ硕士学位论文附子汤质量评价及治疗慢性心衰药效学研究ＴｈｅＱｕａｌｉｔｙｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆＦｕｚｉｄｅｃｏｃｔｉｏｎａｎｄＰｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃＳｔｕｄｙａｂｏｕｔｔｒｅａｔｃｈｒｏｎｉｃｈｅａｒｔｆａｉｌｕｒｅ研究生姓名：张强导师姓名、职称：王瑞副教授学科：、专业名称中药学研究方向：中药质量控制及体内过程研究申请学

2、位类型：科学学位二零一七年三月二十七曰山西中医学院学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中己经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明并致谢。。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担论文作者签名：浓丨年￥月曰１ｑ关于学位论文使用授权的声明本人完全了解山西中医学院有关保留使用学位论文的规定，

3、同意学校保留或向国。山西中医家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅本人授权、学院可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名：论文导师签名：ｉ■月划年ｊ引曰／中文摘要目的：本课题通过正交设计优化附子汤的提取方法，确定其含量测定及指纹图谱研究方法，结合药效学的研究结果对附子汤进行质量评价，为其质量控制提供参考。采用腹主动脉缩窄制备慢性心力衰竭模型大鼠

4、，将附子汤灌胃给予造模成功的大鼠后，测定大鼠的各项生理生化指标，分析附子汤药效作用。通过UPLC/MS技术，鉴定附子汤中的化学成分，为进一步阐明附子汤治疗慢性心衰的药效物质基础提供依据。方法：1.采用HPLC-UV法测定附子汤醇提液中苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱含量，色谱柱为WatersXTerraMSC18色谱柱-1(150mm×4.6mm,5μm)，流动相A为乙腈，B为0.1mol•L乙酸铵溶液(pH-1=6.97)，流速1mL•min，梯度洗脱(0~15min，5%~34

5、%A；15~30min，34%~37%A；30~32min，37%~65%A)；检测波长：235nm；进样量：10μL；检测温度：30℃。采用正交设计优化附子汤的提取技术并进一步建立其指纹图谱。色谱柱为BDSHYPERSILC18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm)，-1-1流动相A为乙腈，B为0.04mol•L乙酸铵溶液(pH=10)，流速1mL•min，梯度洗脱(0~15min，10%~27%A；15~50min，27%~60%A；50~60min，60%A)；检测波长：240nm；进样量：

6、10μL；检测温度：30℃。2.将122只大鼠(雌雄各半)适应性饲养一周，排除心功能异常大鼠后剩余115只，随机分为空白组10只，假手术组12只，模型组93只，采用腹主动脉缩窄法制作慢性心衰大鼠模型。8周后，通过对大鼠一般情况观察，超声检查以及心电图检测的检测结果对大鼠进行心功能判别，以保证实验所采用的大鼠具有代表性。将剩余82只大鼠随机分为8组，即假手术组(10只)，附子汤醇提低(10只)、中(11只)、高(11只)剂量组，模型组(11只)，卡托普利组(10只)，附子汤水提高剂量组(10只)，空白

7、组(9只)，分别按剂量给药4周，观察大鼠一般情况，进行心电图检测和超声检查并采用酶联免疫吸附法测定TNF-α、BNP、IL-6、ALD、Ang-II、NT-proBNP、CK、LDH、ET-1、PRA及CRP含量。3.采用超高效液相色谱-质谱(UPLC/MS)联用技术对附子汤的化学成分进行分析。色谱柱为ACQUITYUPLCBEHC18(100mm×2.1mm,1.7μm)，流动相A为乙腈，B为0.1%甲酸水，梯度洗脱(0~5min，10%~20%A；5~30min，20%~80%A；30~33mi

8、n，80%-1A)；流速0.3mL•min；检测温度：30℃。质谱离子化模式：HESI；正、负离I+-子扫描模式(ESI，ESI)；喷雾电压3.5kV；鞘气流速：40arb；辅助气流速：5arb；毛细管温度：320℃；扫描范围(m/z)：100~1500。结果：1.建立HPLC同时测定附子汤醇提液中苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱含量的方法，苯甲酰新乌头原碱回归方程y=6609.2x-8.6951；苯甲酰乌头原碱回归方程y=10481x-21.324