刘课题1微生物的实验室培养(改)

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1、专题2微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养生物细胞生物非细胞生物病毒真核生物原核生物细菌动物植物真菌：蓝藻微生物其他原生生物：微生物的类群草履虫、变形虫等酵母菌、霉菌、食用菌◆微生物的共同特点：个体微小、结构简单大肠杆菌草履虫变形虫噬菌体霍乱弧菌培养微生物需要解决的两个问题是什么？1、为微生物提供合适的营养条件和环境条件2、防止杂菌的入侵培养基、培养条件无菌技术(获得纯净培养物的关键）一、基础知识（一）培养基按物理性质来分液体培养基固体培养基（加入凝固剂琼脂）按化学组成来分天然培养基合成培

2、养基按用途来分选择培养基鉴别培养基1、概念：人们按照微生物对_________的不同需求，配制出供其_________的营养基质。营养物质生长繁殖2、分类：(大规模工业生产)固体培养基液体培养基3.基本成分：水、碳源、氮源、无机盐⑴碳源无机碳源：有机碳源：CO2、CO32-、HCO3-葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等（培养自养微生物）（培养异养微生物）⑵氮源无机氮源：有机氮源：N2、铵盐、硝酸盐等牛肉膏、蛋白胨、尿素等常用的碳源：糖类（尤其是葡萄糖）（3）满足微生物生长的条件：培养基除要提供上述几种主要

3、营养物质外，还满足微生物生长的pH、特殊营养物质和氧气等要求。pH：真菌5.0~6.0细菌6.5~7.5放线菌7.5~8.5特殊营养物质：培养乳酸杆菌添加维生素氧气：厌氧微生物需提供无氧条件思考1.大肠杆菌，硝化细菌，蓝细菌，乳酸菌分别选用哪种碳源？糖类，二氧化碳，二氧化碳，糖类2.根瘤菌、大肠杆菌、硝化细菌时分别需要哪一类氮源？N2，铵盐、硝酸盐或牛肉膏、蛋白胨等，NH3（二）无菌技术1.获得纯净培养物的关键(目的）是防止外来杂菌的入侵。2.无菌技术包括：（1）对实验操作空间、操作者的衣着和手

4、进行清洁和消毒；（2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌；（3）为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近旁进行；（4）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。思考无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有什么目的？有效避免操作者自身被微生物感染思考：消毒和灭菌的区别？哪一个更彻底？什么时候需要消毒，什么时候需要灭菌？消毒灭菌定义方法较为温和理化方法，杀死部分有害菌体（不包括芽孢、孢子）强烈的理化方法，杀死所有微生物（包括芽孢、孢子）①煮沸消毒法②巴氏消毒法③化学药剂消毒（如酒精、氯

5、气）④紫外线①灼烧灭菌②干热灭菌③高压蒸汽灭菌3.消毒与灭菌芽孢有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌。细菌、原生动物、真菌和植物等产生的一种有繁殖或休眠作用的生殖细胞。能直接发育成新个体。孢子（二）无菌技术4.灭菌方法：（1）灼烧灭菌法：用于金属用具（接种环、接种针）、试管口和瓶口的灭菌；（二）无菌技术4.灭菌方法：（2）干热灭

6、菌法：用于玻璃器皿、金属用具的灭菌，所用设备是干热灭菌箱；160~170℃，1~2小时（二）无菌技术4.灭菌方法：（3）高压蒸汽灭菌法：用于培养基、无菌水等的灭菌，所用设备是高压蒸汽灭菌锅高压灭菌锅121℃，100kPa，15-30分钟请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。旁栏思考1、下列无菌操作中，错误的是()A．无菌操作的目的是防止杂菌

7、污染B．用酒精擦拭双手的方法对操作者进行消毒C．实验操作过程应在酒精灯火焰附近进行D．玻璃皿（吸管、培养皿）可用酒精擦拭D2、高压蒸气灭菌的原理是（）A．高压使细菌DNA变性B．高压使细菌蛋白质凝固变性C．高温烫死细菌D．高温使细菌DNA变性B3.培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌、消毒方法依次是()。①化学消毒　②灼烧灭菌　③干热灭菌　④紫外线灭菌　⑤高压蒸汽灭菌　⑥巴氏消毒法A．⑤③②①④⑥B．①②③④⑤⑥C．⑥②③④①⑤D．③④②①⑥⑤深度剖析培养基用高压蒸汽

8、灭菌；培养皿能耐高温，需用干热灭菌；接种环可用灼烧灭菌达到迅速彻底的灭菌效果；实验操作者的双手可用化学药剂进行消毒，如用酒精擦拭双手；空气可用紫外线消毒；牛奶为不破坏其营养成分可采用巴氏消毒法。答案A二、实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨培养基1000mL牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成培养基组分提供的主要营养牛肉膏5g碳源、氮源、磷酸盐和维生素蛋白胨10g碳源、氮源和维生素NaCl5g无机盐H2O定容至1000mL氢元素、氧元素1.计算（依微生物的生长需要）大肠杆菌的实验室培养可分成和两个阶段进行。制