PGC基因插入-缺失多态片段调控基因表达功能及其机制研究

《PGC基因插入-缺失多态片段调控基因表达功能及其机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：R730.231单位代码：10159密级：公开学号：200910178博士学位论文中文题目：PGC基因插入/缺失多态片段调控基因表达功能及其机制研究英文题目：ThefunctionandmechanismofpepsinogenCgeneinsertion/deletionpolymorphisminregulatinggeneexpression论文作者：宁佩芳指导教师：袁媛学科专业：肿瘤学完成时间：2018年10月中国医科大学博士学位论文PGC基因插入/缺失多态片段调控基因表达功能及其机

2、制研究ThefunctionandmechanismofpepsinogenCgeneinsertion/deletionpolymorphisminregulatinggeneexpression论文作者宁佩芳指导教师袁媛申请学位医学博士培养单位中国医科大学第一临床学院一级学科临床医学二级学科肿瘤学研究方向胃癌早期诊断基础研究论文起止时间2009年12月—2015年12月论文完成时间2018年10月中国医科大学（辽宁）2018年10月I中国医科大学博士学位论文摘要目的：胃蛋白酶原C（PGC）是胃黏

3、膜特异性功能酶-胃蛋白酶的前体，属于天冬氨酸蛋白酶家族的内切蛋白酶，是胃黏膜细胞分化成熟的终末产物。PGC基因7、8外显子间的内含子区存在100bp的插入/缺失多态片段，携带PGC等位基因1纯合型者罹患胃癌和萎缩性胃炎的风险显著增加。PGC基因插入/缺失多态性与胃癌遗传易感性显著相关，可以作为胃癌高风险个体的预警标志。目前，其确切致癌机制尚不清楚，有待探讨。某些内含子具有调节基因启动子活性的功能，某些内含子具有启动子活性。根据DNA序列分析发现PGC基因插入/缺失多态片段内含有TATA盒样序列。TA

4、TA盒对决定转录起始的位置起着至关重要的作用，由TATA盒及转录起始点即可构成最简单的启动子。某些含有TATA盒结构的内含子区特异性序列也具有启动子功能，TATA盒突变或改变与转录起始点的距离都会导致转录在其它位置起始，从而在转录水平影响基因表达。那么，PGC基因插入/缺失片段是否具有启动子活性或者其是否具有调节基因启动子活性的能力呢？这一问题需要深入研究。另外，DNA序列中TATA盒多为转录因子结合位点，能与转录因子相结合,参与转录因子相互作用调控基因的转录过程。是否PGC基因插入/缺失多态片段通

5、过影响转录因子结合能力导致其启动子活性差异，进而影响基因表达水平，亦需进一步研究证实。本研究旨在通过研究PGC基因插入/缺失多态片段启动子活性及转录调控功能，明确其对基因表达的调控作用。期望通过本项研究，为系统阐明PGC基因多态与胃癌遗传易感性的关系，建立有效的胃癌高风险个体预警标志提供有价值的实验依据及理论参考。同时，为进一步探讨了PGC与其他胃癌标志物的联合检测的意义，我们探讨胃黏膜分化蛋白PGC和胃癌相关抗原MG7联合表达预测胃癌和胃癌前病变进展风险的价值。方法：1.采用Real-timePC

6、R方法分别特异性扩增不同基因型的PGC基因及8-9外显子的mRNA,采用SP免疫组织化学染色检测不同胃黏膜组织PGC蛋白表达情况，比较不同的PGC基因插入/缺失多态片段对PGC基因表达有何影响。2.构建PGC基因插入型及缺失型以及PGC基因启动子4200bp的荧光素酶表达载体，利用双荧光素酶报告基因系统测定PGC基因插入型、缺失型、启动子以及插入型+启动子和缺失型+启动子各组的荧光素酶活性，比较分析不同多态片段启动II中国医科大学博士学位论文子活性的差异及其对PGC基因启动子活性调节能力的差异。3.

7、生物信息学预测与PGC基因插入/缺失多态片段结合的转录因子；采用EMSA方法检测PGC基因插入/缺失多态片段是否能与转录因子特异性结合。4.采用SP免疫组化染色检测同一胃粘膜活检标本中PGC和MG7蛋白共同表达情况。绘制ROC曲线计算胃癌及其癌前病变诊断效能。对研究对象进行随访研究。结果：1.PGCmRNA在胃癌组的表达水平显著低于非癌组（F=40.772）。非癌人群中，等位基因1纯合型组PGCmRNA的表达显著低于等位基因1杂合型（F=2.038）和其它型组（F=5.550）；等位基因1杂合型组显

8、著低于其它型组（F=3.503）。胃癌人群中，等位基因1纯合型组PGC基因mRNA表达显著低于等位基因1杂合型（F=9.420）和其它型组（F=2.138）；PGC基因8-9外显子表达率各组间差异无统计学意义（F=1.329,F=1.866）。从其它型→等位基因1杂合型→等位基因1纯合型，PGC蛋白阳性表达率依次逐渐降低，等位基因1纯合型组与其它型组间差异有统计学意义（p=0.009），经年龄性别调整OR值为2.114(95%CI1.177-3.817)；GS组PGC