GBT18638-2002 流行性乙型脑炎诊断技术 - 下载地址.pdf

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1、CB/'r18638--2002前台流行性乙1q'j脑炎又称日本乙型脑炎(JapaneseBencephalitic)，是山流行性乙NUR炎病毒引起的一种蚊媒性人兽共患传染病成年动物和人常呈隐性感染，幼龄动物特别是马感染后，可发生脑炎症状。妊娠母猪可引起流产、死胎及木乃伊胎，公猪翠丸肿大，儿童可发生严重的脑炎。多发生于7-9月份。我国许多省(Ili)都有本病发生，特别是六t-f年代，发病率最高。对人畜的健康可造成严重的威胁世界动物卫生组织和日本的资料，都采用病毒分离鉴定、免疫荧光试验、血凝抑制试验、补体结合试验、血清中和试验等进行诊断我国对木病的研究报道较多，而比

2、较常用的诊断方法仍是本标准规定的病毒分离鉴定、血凝抑制试验、补体结合试验病毒分离鉴定适用于流行性乙型脑炎新疫区的确定和病畜的确诊。间接免疫荧光试验适用于可疑流行性乙型脑炎病毒标本的快速检测和病毒分离株的初步鉴定。补体结合试验，由于补体结合抗体一般在病后2-3周出现，5-6周达高峰，并可维持1年以L，故可适用于流行性乙A9脑炎的较早期诊断和流行病学调查，是最常用的方法。根据当时的实际需要，可任选一种或两种检疫方法。以达到准确诊断的卜!的。本标准的实施，对提高乙型脑炎的诊断和疫情预测水平，及时采取防制措施，保证人畜健康，将起到重要的作用。本标准的附录A、附录B都是标准

3、的附录本标准由，!，华人民共和国农业部提出。本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。本标准起草单位:中国人民解放军农牧大学。本标准主要起草人:李佑民、宣华、李金中、刘振润。中华人民共和国国家标准GB/'r18638--2002流行性乙型脑炎诊断技术DiagnostictechniquesforepidemicencephalitisB范围本标准规定了流行性乙型脑炎的病毒分离与鉴定、间接免疫荧光试验、补体结合试验、血凝抑制试验等技术要求本标准适用于l-1岸、产地及集散地、饲养单位(或个人)的猪、马、骡、驴、牛、羊等的流行性乙型脑炎的诊断和检疫2病毒的分离与鉴定2门

4、材料准备2门门器材:细胞培养瓶〔或管)，吸管.中试管，三角烧瓶，37C水浴箱,37C恒温箱，普通冰箱及低温冰箱，离心机及离心管，研磨器械，普通光学显微镜，G5级玻璃滤器，孔径。.45lam的微孔滤膜，0.25mL注射器及针头。2.1.2试剂:汉克氏(Hanks)4,0.5%水解乳蛋白Hanks液，2万工U/m工青霉素液，2万Ixg/ML.链霉素液，7%碳酸氢钠液,1%胰蛋白酶液,1%酚红(中性)液，伊格尔氏(Eagle)最低必要成分培养液(EMEM)，小牛血清2.1.3小动物:小鼠(6g-8g)、乳鼠2门.4鸡胚细胞、绿猴肾传代细胞(Vero)、仓鼠肾传代细胞(B

5、HK,,)、白蚊伊蚊C6/36传代细胞等。2-2病毒分离2.2门样品的采取和运送2.2门门在流行的早期和发病的早期(即病毒血症阶段)，无菌采取病畜的血液或脑脊髓液。2.2.1.2应在病畜死亡后3h内(越早越好)采取脑组织(选大脑皮质、脑干、中脑、海马回及桥脑)数小块放于灭菌玻璃瓶2.2.1.3猪应采取流产死胎的脑组织，置冰箱内立即送检2.2.1.4不能立即检查者，应放一25C一一30C冰箱，或加50%甘油生理盐水，4C保存送检2.2.2样品的处理2.2-2.1血液应分离出血清或血浆。2.2.2.2脑脊髓液可直接应用。2.2.2.3脑组织应研磨成糊状，加入0.5%水

6、解乳蛋白Hanks液(或碱性肉汤或10%脱脂奶生理Sh水)，制成10写悬液，3000r/min离心30min，吸取上清液，加入青霉素500IU/ml和链霉素500pg/ml，在4C处理3h-4h无污染者可不加青、链霉素处理)，即得接种样品。2.2-2.4怀疑有污染的样品，也可用。.45lam微孔滤膜过滤法处理。2.2.3动物分离法2.2-3.1取6g-8g小鼠10只(或3-5日龄乳鼠一窝)，用左手固定，在耳与眼之间用碘酒消毒右手持吸取接种样品的0.25ml·注射器在消毒部刺人硬堕些互旦生生二竺生燮丝垫些二生鱼塑中华人民共和国国家质f监督检验检疫总局2002-02-

7、19批准2002-05-01实施标准分享网www.bzfxw.com免费下载CB/T18638-20020.01ml，一。.02ml)。然后用左手拇指及食指抓住小鼠头顶部皮肤，翻转左手，使小鼠腹部朝上，将其尾部夹在左手掌与小手指之间，消毒腹部，右手持注射器向腹腔内注人样品0.2m1_-0.5m工。2.2.3.2对照小鼠2只，按同法同剂量注射稀释液2.2.13接种后2d--4d，如对照鼠正常，而注射样品的小鼠表现松毛、弓背、沉郁、震颤、绕圈、后肢麻痹、继而死亡者，应解剖取鼠脑组织，按2.2.2.3制成接种样品，按2.2.3.1再接种小鼠。连续2代接种小鼠均有发病致死

8、者，而且未