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1、藻胆蛋白的生物合成及光谱分析作者：邱容朱鐵谢雪林作者单位：湖北师范学院生命科学学院0803班(邱容、朱炎)湖北师范学院生命科学学院0801班(谢雪林)摘要：藻胆蛋白是红藻、蓝绿藻、隐藻中的捕光色素蛋白，主要成分为藻红蛋白(Phycoerythrin,PE),藻红蓝蛋白(Phycoerythrocyanin,PEC),藻蓝蛋白(Phycocyanin,PC)和别藻蓝蛋白(Allophyxoxyanin,APC)。本实验只是进行藻蓝蛋白的生物合成及光谱分析，通过将载有藻蓝蛋白基因的质粒导入E.coli中，从而构建能合成藻蓝蛋白的工程菌，通过对工程菌的扩
2、大培养，诱导表达,进而从工程菌中通过亲和层析法提取所需的藻蓝蛋白。提取的藻蓝蛋白通过紫外可见光谱仪进行光谱分析。关键词：藻蓝蛋白生物合成光谱分析Abstract:Phycobilin,akindofproteinwhichcancatchlight,existinRedalgae,blue・greenalgae,cryptomonad.ltconsistsofPhycoerythrin(PE),Phycoerythrocyanin(PEC),Phycocyanin(PC)andAllophyxoxyanin(APC).Thisreportprese
3、ntsthebiosynthesisandspectralanalysisofthePC,bysendingtheplasmidscarryingthegenewhichcanproducePCintoE.coli,thuscreatingtheengineeringbacteriumwhichcanprocucePC.Throughtheexpandingculture‘inductionandtheaffinitychromatography,wecanextractPCfromtheengeneeringbacteriumtoobtainPC
4、・ExtractionofPCcanbespectralanalysedbyUV-visiblespectrometer.Keywords:Phycobilinbiosynthesisspectralanalysis藻胆蛋白是一种水溶性色素蛋白，存在于红藻、蓝藻、隐藻和某些甲藻体内，是这些藻类特有的光合系统捕光色素，在光合作用中起捕集光能和传递能量的作用，根据结构和光谱特性可将藻胆蛋白分为藻红蛋白、藻蓝蛋白和别构藻蓝蛋白。藻胆蛋白具有性质稳定，荧光量子产量高，背景干扰小，易于同生物素、抗体和糖蛋白等大分子交联等特点，既可以作为天然色素广泛应用于食品
5、、化妆品、染料等工业，又可制成荧光试剂，用于临床医学诊断、免疫化学及生物工程等领域，还可以作为光动力治疗癌症。本实验只是进行藻蓝蛋白的生物合成及光谱分析，通过将载有藻蓝蛋白基因的质粒导入E.coli中，从而构建能合成藻蓝蛋白的工程菌，通过对工程菌的扩大培养，诱导表达，进而从工程菌中通过亲和层析法提取所需的藻蓝蛋白。提取的藻蓝蛋白通过紫外可见光谱仪进行光谱分析。1、材料与方法1.1材料:菌种（已导入藻蓝蛋白基因的工程菌）LB培养基卡那霉素氯霉素异丙基硫代-B-D-半乳糖昔（isoprophylthio-p-D-galactoside，简称IPTG）超
6、声缓冲液（0.5mol/LNaCL20mmol/L磷酸钾缓冲液（KPP）,pH7.2）0.5mol/L氯化鎳柱平衡液洗脱液I(0.5mol/LNaCk20mmol/L磷酸钾缓冲液，pH7・2),洗脱液II(50mmol/L咪哇、0.5mol/LNaCL50mmol/L磷酸钾缓冲液(pH7.2)),透析液(50mmol/LKPP,0.5mol/LNaCl,pH7.2)1・2方法:1.2.1、菌种的活化配置LB培养基1L(蛋白M10g.酵母提取物5g、氯化钠10g,20mino)(7.20、14:00)取10ul的保存大肠杆菌接种于5ml的LB培养基中
7、，添加抗生素(卡纳霉素12ul、氯霉素6ul),37C摇床培养过夜。(7・20.19:00)将试管中活化的1ml菌液接种到100mlLB培养基，同时加入抗生素(卡纳霉素240uk氯霉素120ul),培养基于371摇床振荡培养6小时。(7.21、8:00)1.2.2.诱导藻蓝蛋白的生物合成扩大培养的10ml菌液接种到250mlLB培养基，同时加入抗生素(卡纳霉素600uL氯霉素300ul),培养基于37€摇床振荡培养。培养至OD600约为0.5-0.6,10°C水浴中放置1hT。(7.21、14:00)加入IPTG至终浓度为lmmol/L。2(TC低
8、温、避光、过夜诱导,摇床转速为100r/mino(7.21.19:00)离心(4000rpm,5min)收集细胞,二次蒸馆
