《中药制药分离工程》课程计划性实验指导讲义

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1、《中药制药分离工程》课程实验讲义V第一版〉主编：彭国平副主编：郑云枫李存玉李红阳芍药甘草汤的精制分离一、实验目的1、掌握设计中药复方的精制分离方法与技术2、掌握芍药廿草汤分离过程中的醇沉、超滤、树脂吸附技术3、熟悉不同精制工艺对芍药甘草汤的固含物及有效成分的影响4、了解大孔树脂、超滤等吸附、分离原理二、仪器与试剂1、仪器：电磁炉、煎煮锅、量筒、药典筛、药液桶、天平（百分之一、十万分之一）、表面皿、蠕动泵、超滤膜（截留分子量lOKDa、lOOKDa）、量筒、烧杯、旋转蒸发仪、敞口玻璃柱（H：60cm,0：3.5c

2、m）,滴水阀、高效液相色谱仪2、药材：赤芍、甘草3、试剂：蒸憎水、大孔树脂（HPD400）、95%乙醇，乙月青、甲醇、三氟乙酸均为色谱纯，纯净水三、实验内容1、芍药甘草制剂的制备称取药材赤芍300g、甘草300g置于煎煮锅中，加10倍量水，提取2次，每次2小时，合并提取液，抽滤，得芍药廿草提取液。2、实验实施方式根据实验分组，每组同学中药制药分离技术课程所学，选择组别所感兴趣的制备工艺，即以下3种芍药甘草汤精制工艺中的一种展开实验，分别分析不同工艺对芍药昔、甘草酸和甘草昔的得率，所制备的有效部位的固含物，并汇报

3、、讨论。采用相同工艺的组别制备的有效部位成分含量及固含物作为组别间评分比较的指标。3、精制分离工艺工艺一、醇沉工艺取芍药甘草提取液，加热浓缩，浓缩至药液比重为1.1-1.2g/mL,加入95%乙醇使得浓缩液醇浓度为70%,4°C放置12小时，滤出上清液，采用旋转蒸发仪减压浓缩（70°C）至无醇味，得芍药甘草汤清膏。工艺二、超滤工艺取芍药甘草提取液，布氏漏斗抽滤，收集滤液，进而采用截留分子量为lOOKDa的超滤膜超滤，待充分平衡后，分别收集超滤液。工艺三、大孔树脂吸附工艺取芍药甘草提取液，调节pH为5〜6之间，取

4、预处理好的200mL大孔树脂树脂装柱，芍药甘草提取液，控制流出液速度在20mL〜50mL之间，待上样液面与树脂接近时，采用蒸憾水洗脫2倍柱体积。然后，采用70%的乙醇（3倍柱体积）洗脱，收集流出液，旋转蒸发仪冋收乙醇，蒸徭水洗岀浓缩液，量取体积,得有效部位。4、检测①固含物检测将表面皿洗干净后置于105°C烘箱中，烘至恒重；精密量取原液、醇沉液、超滤液和大孔树脂70%乙醇洗脱液各10mL,置于已恒重的表面皿中，蒸干，置烘箱中105°C,干燥2h,取出放入干燥器中，冷却至室温，称量，再放至烘箱中（105°C）干燥

5、lh,两次的重量差异低于0.3mgo②成分检测（1）甘草酸测定色谱条件与系统适用性实验以十八烷基硅烷健合硅胶为填充剂，以乙睛■0.1%三氟乙酸（40-60）为流动相，检测波长为254nmo对照品溶液的制备取甘草酸对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每1曲含甘草酸200pg的溶液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10pl,注入液相色谱仪,测定，即可。（2）甘草昔测定色谱条件与系统适用性实验以十八烷基硅烷健合硅胶为填充剂，以乙月青■0.1%三氟乙酸（20-80）为流动相，检测波长为276nmo对照片

6、溶液的制备取甘草昔对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每lml含廿草营200pg的溶液，即得。测定法分别精密吸取对照甜溶液与供试品溶液各10pl,注入液相色谱仪,测定，即可。（3）芍药昔色谱条件与系统适用性实验以十八烷基硅烷健合硅胶为填充剂，以甲醇-0.1mol/L三氟乙酸溶液（40：60）为流动项；检测波长为230nm。对照品溶液的制备取经五氧化二磷减压干燥器屮干燥36小时的芍药廿对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含100pg的溶液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10pl,注入液相色谱

7、仪,测定，即可。四、结果与讨论1、对比醇沉、超滤、树脂吸附技术对芍药廿草汤中固含物的影响，哪种除杂效果较好。2、对比醇沉、超滤、树脂吸附技术对芍药甘草汤有效成分芍药昔、甘草昔、甘草酸的精制效果。3、中药制剂在生产过程中，应该选用哪些分离技术，实现制剂的成分保留和杂质的去除，以及此类技术的优缺点。五、注意大孔树脂预处理：取大孔树脂（HPD400）200mL,用95%乙醇浸泡12h。一次性倒入敞口玻璃柱中，排出气泡。蒸憾水冲洗至无醇味，再用2・3倍树脂体积3%NaOH冲洗，再用2-3倍树脂体积3%HC1冲洗，再用蒸

8、惚水冲洗至屮性，即可。