流式细胞仪结构及工作原理

《流式细胞仪结构及工作原理》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、流式细胞仪结构及工作原理三个子系统一个流式细胞仪由三个主要系统组成：射流系统、光学系统、电子系统射流系统光学系统电子系统射流系统样品鞘液流室废液激光射流系统将载有颗粒的射流液转运至激光束以待筛查。鞘液往往是某种盐溶液处于鞘液中含样品颗粒的样品液称为抽样核心。一般地，样品浓度为2×105至1×107cells/mL射流液经过流室时，鞘液与样品液相遇。样品液被注入鞘液的中央。当二者流经一个变窄的通道时，抽样核心仍处于鞘液中央。这个过程被称作流体聚焦。流室的设计使流体聚焦得以发生并使每次只有一个细胞或其它颗粒通过激光束。鞘液鞘液样品液样品液的压力与鞘液的不同，样品液压力更高。样品液压力

2、能调节以增大或减小抽样核心的宽度，从而提高或降低采样率。抽样核心越宽，接受激光越少，检测灵敏度也降低。因此对于需要高灵敏度的实验操作，例如DNA分析，需要用较窄的抽样核心（低采样率）。光学系统光学系统功能包括：提供激发光源（激光发射器）收集散光（透镜）将特定波长的光传到相应探测器（滤镜）透镜滤镜激光前向散射偏向散射光学系统又由两部分组成：激发系统与收集系统激发系统由蓝、红激光发射器，光束形成棱镜，方向盘，聚焦激光束并将其指向射流液的透镜组成收集系统用于收集样品经过激光束时产生的光。具体来说，透镜收集粒子与激光碰撞后相互作用形成的光，一个光镜系统和滤镜将收集到的光按波长传至相应光探

3、测器。滤镜有如下三种：滤镜使波长≥500nm的光通过滤镜使波长≤500nm的光通过滤镜使波长≥475nm且≤520nm的光通过通过率波长电子系统电子系统的主要功能包括：量化电压脉冲将模拟信号转化为数字信号将数据传至计算机用于分析电子系统由光电探测器（Photodetectors）、放大器（Amplifier）、信号处理器（SignalProcessor）以及计算机工作站（ComputerWorkstation）组成光电控测器又由光电倍增管和光电二极管组成光电二极管光电倍增管光电倍增管比光电二极管敏感，用于探测非正向散射及荧光产生的较弱信号光电二极管不如光电倍增管敏感，用于探测正向

4、散射产生的较强的信号光信号到达光电探测器后即被转化为电信号电脉冲因此产生并由电子系统处理正向散射非正向散射探测器放大器放大器对传入信号进行修饰，转为电压信号输出光电倍增管供电设备颗粒经过激光束时产生电压脉冲，当颗粒到达激光束中央时电压值达到最大。信号处理器从电压脉冲产生时开始工作，经处理的信号包括脉冲峰值、脉冲区域及脉冲宽度。只有高于规定阈值的电压才能被处理。光信号被转换为相应同等大小的电压信号后被进一步处理成为相应数值。这些数据最后被计算机以流式细胞仪标准版式存储下来。根据记录数据在坐标上做图，每个数据对应一个点。众多点构成几个密集区域，即区分出记录颗粒的不同类型。这样得到的图

5、即为流式细胞仪标准版式。各种不同的标准版式流式细胞仪的分选功能如图所示，绿色的细胞被充以正电，红色细胞被充以负电。因此当二者混全物通过正负电极板时，绿色的细胞偏向负极板，红色的细胞偏向正极板。二者分开并分别注入下方收集管。