流式细胞仪原理及软件介绍

《流式细胞仪原理及软件介绍》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、流式细胞仪FLOWCYTOMETER原理及软件介绍BeckmanCoulter流式细胞仪发展史1947年WallaceCoulter发明了库尔特原理，用于血细胞分析1953年推出了世界上第一台流式细胞分析仪CoulterCounterModelA1972年推出世界上第一台激光流式细胞仪EPICSII1975年研制出世界上第一台带计算机的流式细胞仪1997年推出世界上第一台单激光四色数字化流式细胞仪EPICSXL/MCL2000年首先将高精度数字化颜色补偿技术ADC（AdvancedDigitalCompensation）应用于流式平台，引领流

2、式进入全新的全矩阵补偿、全自动补偿和脱机补偿时代2003年推出世界上第一台单激光五色的流式细胞仪FC500/MCL，2005年升级为FC500/MPL2006年推出世界上第一台具有EV参数同时进行无成本绝对计数的多功能细胞分析系统QuantaSC，将流式细胞术与库尔特原理完美结合，2007年推出MPL进样系统2007年收购Dako公司的Moflo和Cyan，使Beckman公司成为高端流式市场的领导者2009年，推出世界是第一台三激光十色的分析型流式细胞仪Gallios/NaviosEPICSXL-ADCQUANTASCCytomicsFC5

3、00BeckmanCoulterCelllabFamilyMoFloXDPGallios/NaviosCyanADPFC500硬件Whatisflowcytometry?流式细胞术是单个细胞/颗粒流过检测装置过程中，检测到的物理和/或化学的特性。HowardShapiro,PracticalFlowCytometry,3rdEdition分类分析型：只能分析用，液流进入废液筒分选型：回收目标细胞，用于后续实验。要求管道绝对无菌。基本原理流路（液流系统）流动室鞘液SHEATH样本流SAMPLE单细胞悬液5*105~1*106个/ml光路（光学系

4、统）光源滤片光电倍增管PMTHV电路（电路系统）放大电路HV及GAIN增益A/D转换分析系统：计算机液流系统流路构造流路单细胞悬液大多数仪器是在50-300µm大小的孔径中,将细胞悬液注射进入鞘液中这一过程,成为流体动力学聚焦FLOWCELLInjectorTipFluorescencesignalsFocusedlaserbeamSheathfluid光路系统光路构造光路光源检测信号散射光信号FS:前向角散射光SS:侧向角散射光(90度散射光)荧光信号荧光染料光学滤片光路光源与通过的细胞聚焦在同一点上激光空冷488nmblue,633nmr

5、ed,325nmUV,514nmgreen,空冷/水冷EnterpriseII水冷Innova300系列Innova70系列常用激光器及其通道分配表检测信号散射光信号—前向散射光(FS)FS----Forward(AngelLight)Scatter在激光束正前方的检测器,为前向散射光检测器FS的强度与细胞或其他颗粒的大小,形状及opticalhomogeneity有关FS用于检测细胞或其他粒子的表面属性如:大小FALSSensorLaser前向散射光前向散射光散射光信号–侧向散射光SS-Side(AngelLight)Scatter与激光束

6、垂直方向的检测器为侧向检测器,也称为90度散射光检测器SS用于检测细胞内部结构如:胞浆内颗粒多少,核质比FALSSensor90LSSensorLaser侧向散射光侧向散射光90DegreeScatter02004006008001000815203040501002001000LymphocytesMonocytesNeutrophilsSideScatterProjectionLightScatterGatingScale光路-荧光信号每种荧光染料均有特定的激发波长,并激发后会有发射波长,流式细胞仪检测的即是它特定的发射波长.利用各种不同

7、波长的光学滤片来收集(检测)这些光学信号荧光染料的特性激发波长(EXCITING)发射波长(EMISSION)常用荧光染料的特性荧光染料激发波长(nm)发射波长(nm)用途颜色FITC488525免疫荧光绿色PE(RD1)488575免疫荧光橙色ECD488620免疫荧光橙红PeCy5488675免疫荧光红PI488620DNA染色橙红PECy7488755免疫荧光深红PerCP488670APC6336705ColorSingleLaser(488nm)FITC/PE/ECD/PC5/PC7荧光染料比较(平均荧光强度)Q-Prep/Immu

8、noPrep试剂系统PerCP