流式细胞仪工作原理

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1、流式细胞仪工作原理刘益年产品应用专员美商必帝股份有限公司Email:kenny_liu@bd.comFACSCalibur大纲实验设计原理流式细胞仪运作原理FACSCalibur操作流程IntroductionoftheexperimentdesignforFlowCytometry藉由萤光抗体标识细胞之抗原特性藉由萤光化合物标识细胞特性藉由萤光染剂标识细胞特性藉由萤光蛋白标识细胞特性CytometryBeadsArray单一细胞特性之侦测单一细胞特性之侦测AdhesionReceptorsMetaboliccytokinesstructureenzymesLysedWholeBlood

2、ComponentsGranulocytesMonocytesEosinophilsBasophilsNeutrophilsLymphocytesTBNKTHelperTCytotoxicPeripheralWhiteBloodCellsCD45+CD3+CD4+CD3+CD8+CD3+CD3-CD19+HLA-DR+CD3-CD16+CD56+MonocytesExample信息传导BD™PhosFlowforWholeBloodorPBMCSampleshttp://bdphosflow.comMappingnormalandcancercellsignallingnetworks:

3、towardssingle-cellproteomics.NatRevCancer.2006Feb;6(2):146-55DevelopmentOfVisualizationToolsNolanetal.IrishJM,HovlandR,KrutzikPO,PerezOD,BruserudO,GjertsenBT,NolanGP. Singlecellprofilingofpotentiatedphospho-proteinnetworksincancercells.Cell.2004Jul23;118(2):217-28.ClusteringofBiosignature,Clinica

4、lSignificance实验设计原理藉由萤光抗体标识细胞之抗原特性藉由萤光化合物标识细胞特性藉由萤光染剂标识细胞特性藉由萤光蛋白标识细胞特性CytometryBeadsArrayAnnexinVAssayFlowCytometricAnalysisofApoptosis inJurkatTCellsRelativeCellNumberAnnexinVPE00.5124IncubationwithCamptothecin(hr)Fas-inducedApoptosisinJurkatCellsPIAnnexinV-FITC实验设计原理藉由萤光抗体标识细胞之抗原特性藉由萤光化合物标识细胞特

5、性藉由萤光染剂标识细胞特性藉由萤光蛋白标识细胞特性CytometryBeadsArrayDNA特异性染剂N+C2H5NH2NH2EthidiumN+C2H2)3NH2NH2N+C2H5CH3C2H5PropidiumG2MG0G1s02004006008001000G0G1sG2MDNAcontentCount2N4N细胞周期位相的决定SubG1细胞增殖反应细胞增殖反应实验设计原理藉由萤光抗体标识细胞之抗原特性藉由萤光化合物标识细胞特性藉由萤光染剂标识细胞特性藉由萤光蛋白标识细胞特性CytometryBeadsArrayGFPasReporterGFPasaReporterGFPasaR

6、eporterTheUsageofGFPGervaix,A.et.al.1997.AnewreportercelllinetomonitorHIVinfectionanddrugsusceptibilityinvitro.PNASvol.94.GFPasaReporterGFPasaReporter实验设计原理藉由萤光抗体标识细胞之抗原特性藉由萤光化合物标识细胞特性藉由萤光染剂标识细胞特性藉由萤光蛋白标识细胞特性CytometryBeadsArrayCytometricBeadsArray(CBA)SingleStepIncubationTwo-StepIncubationorBeads

7、ProvideaFlexiblePlatformMultiplesizesBeadsprovideanexpandableassayplatformforusewithaflowcytometerDifferentintensities*DifferentcolorswithdifferentintensitiesProteinsMeasuredA.Interleukin(IL)-2B.IL-4C.IL-5D.IL-10E.Tumo

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