藏药镰形棘豆毒性和化学成分相关性研究

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1、藏药镰形棘豆毒性和化学成分相关性研究[摘要]将镰形棘豆全草分为地上和地下部分,分别用不同溶剂提取得到地上水溶、地下水溶、地上脂溶、地下脂溶4种提取物。各提取物以最大剂量(以生药量计为50g•kg-1•d-1)连续灌胃小鼠15d,各组小鼠外观和行为未见明显异常,但脏器系数、血液生化指标、组织病理切片等分析表明地上和地下脂溶性提取物对小鼠肝脏有轻中度损伤,地上和地下水溶性提取物及地下脂溶性提取物对小鼠肾脏有轻度损伤。化学成分分析表明地上和地下脂溶性提取物含有丰富的黄酮昔元,尤以地上部分含量较高,而多

2、糖和蛋白含量较低;地上和地下水溶性提取物则含有较多多糖和蛋白,黄酮昔元含量较低。[关键词]藏药;镰形棘豆;亚急性毒性;化学成分镰形棘豆OxytropisfalcataBunge系豆科棘豆属多年生草本植物,主产于青藏高原的青海、西藏、甘肃南部、四川西部等地。藏药称其为“俄大夏”,享有“草药之王”的美称。其全草入药,具有清热解毒、愈创生肌、止血等功效,为治疗湿疹、疫彷、炎症、血病、黄水、疥疮、肿痛等的良药[1-2]o棘豆属中多种植物具有毒性,为重要的草原毒草,并与黄茂属有毒植物统称为“疯草”,家畜在

3、其他植物缺少或长势不好的情况下,长期或大量采食,可引起以慢性神经机能障碍为特征的中毒病,主要表现为精神沉郁、反应迟钝、食欲下降、虚弱、消瘦,甚至出现濒死状态及死亡;其对母畜的影响主要表现为出现流产、弱胎、畸胎等毒性反应[3-4]o我国已报道的棘豆属疯草有23种,其中甘肃棘豆0.kansuensis、毛瓣棘豆0.hirta、黄花棘豆0.ochrocephala>小花棘豆0.glabra>包头棘豆0.glabravar.drakeana、宽苞棘豆0.latiracteata和冰川棘豆0.glacia

4、lis等[5-8]为优势种,关于镰形棘豆的毒性报道并不多见。霍星华等[9]研究发现,低浓度的镰形棘豆正丁醇提取物对小鼠的骨髓嗜多染红细胞和精子没有致突变作用,而高浓度的镰形棘豆正丁醇提取物对小鼠的骨髓嗜多染红细胞和精子有致突变作用。为进一步了解镰形棘豆毒性及毒性成分,本课题对镰形棘豆地上和地下部位的脂溶性和水溶性提取物在最大剂量下(以生药量计为50g・kg-1・d-1)连续给药15d后对小鼠的亚急性毒性进行研究,并对比分析不同部位的主要成分,旨在评价其毒性作用,寻找可能的毒性成分,为镰形棘豆的临

5、床应用及进一步开发提供科学依据。1材料与方法1.1药物镰形棘豆药材于2008年8月采自青海省贵德县松巴村,自然晾干,并由北京大学医学部药学院张英涛副教授鉴定为镰形棘豆0.falcata。药材标本存放于北京大学医学部药学院天然药物学系。1.2试剂与仪器聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯(吐温-80,天津市津科精细化工研究所),配成1.0%的水溶液密封保存;40%甲醛溶液(北京化学试剂公司),配成4.0%的甲醛水溶液密封保存;分析纯石油瞇、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、无水乙醇、甲醇、甲酸(北京化工厂);色谱乙睛(

6、北京百灵威试剂公司);硅胶GF254薄层板(MerckKGaA)oHITACHI-7170A型全自动生化分析仪(Hitachi公司);显微镜(日本Nikon公司,E400显微镜系统,DXM1200F型摄像系统);SHIMAZDALC-10ATvp高效液相-二极管阵列检测(HPLC-DAD)系统(日本岛津公司),色谱柱为配有PhenomenexC18-RP保护柱(4.0mmX10mm)的PhenomenexC18-RP分析柱(4.6mmX250mm,5ym,Torrance,California,

7、USA)O1.3动物健康昆明小鼠(清洁级)60只,雌雄各半,起始体重(20±2)g,由北京大学医学部实验动物中心提供[SYXK(京)2002-0002]o饲养环境温度为21〜25°C,自动通风,明暗周期12h/12h,自由摄食饮水。1.4镰形棘豆提取物的制备镰形棘豆全草分成地上和地下部分后各取500g,粉碎,分别用95%乙醇回流提取2次,每次2h,提取液合并,回收溶剂至干,待用。药渣再分别用水煎煮2次,每次2h,煎煮液合并,回收溶剂至干,待用。95%乙醇提取物浸膏用适量95%乙醇溶解,上清液回收

8、溶剂至干作为脂溶性提取物,不溶物与水煎煮液的浸膏合并,作为水溶性提取物。按此方法将镰形棘豆分成地上水溶(I)、地下水溶(II)、地上脂溶(III)和地下脂溶(IV)4种提取物。上述各提取物均按照4:1比例分成2份,分别用于毒性和化学成分分析。I和II组用于毒性和化学成分分析的样品分别配成240,60mL的饱和水溶液;III和IV组用于毒性实验的样品配成240mL1.0%吐温-80混悬溶液,用于化学分析的样品配成60mL的甲醇溶液。1.5镰形棘豆提取物的毒性实验1.5.1动物分组及实验方法经环境适

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