菌落总数检验步骤1很详细

《菌落总数检验步骤1很详细》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、菌落总数检验步骤第一法平板菌落计数法1操作步骤1.1样品的稀释1.1.1固体和半固体样品：称取25g样品置盛有225niL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，5OOOr/min^lO000r/min均质1min"2min,或放人盛有225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器扌H打1min"2min,制成1：10的样品匀液。1.1.2液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1：10的样品匀液。1.1.3用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1：10样品匀液1mL

2、,沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管屮（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用一支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1：100的样品匀液。1.1.4按1.1.3操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用一次1mL无菌吸管或吸头。1.1.5根据对样品污染状况的估计，选择2个~3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，每个稀释度分别吸取1mL样品匀液加人两个无菌平皿内。同时分别取1mL稀释液加人两个无菌平皿作空白对照。1.1.6及时将15mL〜20mL冷却至46°C的平板计数琼脂培养基（可放置

3、于46°C±1°C恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。1.2培养1.2.1琼脂凝固后，将平板翻转，36°C±1°C培养48h±2h。水产品30°C±1°C培养72h±3h・1.2.2如果样品屮可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖•薄层琼脂培养基（约4mL），凝固后翻转平板，按6.2.1条件进行培养。1.3菌落计数可用肉眼观察，必要吋用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony一formingunits,CFU）表示。1.3.1选取菌落数在30CFIT300CFU之间

4、、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。1.3.2其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布乂很均匀，即可计算半个平板后乘以2,代表一个平板菌落数。1.3.3当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。2结果的表述2.1菌落总数的计算方法1.1.1若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平

5、均值乘以相应稀释倍数，作为每克（或毫升）中菌落总数结果。7.1.2若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按式（1）计算：N=SC/（nl+O.In2）d（1）式中：N—样品中菌落数；SC-平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；nl-第一个适宜稀释度平板上的菌落数；n2-第二个适宜稀释度平板上的菌落数；d—稀释因子（第一稀释度）。2.1.3若所有稀释度的平板上菌落数均大于300,则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。2.1.4若所有稀释度的平板菌落数均小于30,则应按稀释度最低的平均菌

6、落数乘以稀释倍数计算。7.1.5若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。2.1.6若所有稀释度的平板菌落数均不在30~300之间，其中一部分小于30或大于300时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数计算。2.2菌落总数的报告2.2.1菌落数在100以内时，按“四舍五人”原则修约，采用两位有效数字报告。2.2.2人于或等于100时，第三位数字采用“四舍五人”原则修约后，取前两位数字，后面用0代替位数；也可用10的指数形式来表示，按“四舍五人”原则修约后，采用两位有效数字。2.2.3若所有平板上为蔓延菌落

7、而无法计数，则报告菌落蔓延。2.2.4若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。2.2.5称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。第二法菌落总数Petrif订mTM测试片法3检验程序除将平板计数琼脂培养基改成Petrif订mTM菌落总数测试片外，其他与第5章相同。3操作步骤3.1样品的稀释按照6.1.T6.1.2制备1:10的样品匀液后，用1mol/L氢氧化钠(NaOII)或1mol/L盐酸(IICL)调节pH至6.6~7・2。3.2接种根据对样本污染状况的估计，选择2个飞个适宜稀释度的样品匀液进行检验。将测试片置于平坦实验台

8、表面，揭开上层膜，用吸管或微量移液器吸取1mL样品匀液，垂直滴加在测试片的中央，