菌落总数检验操作规程

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1、汉臣氏（沈阳）儿童制品有限公司文件编码第6页共6页菌落总数检验操作规程颁发部门质量部新订■修订□复审□页数共2页文件性质管理标准■操作标准□技术标准□文件编码原编编码起草年月日审核年月日批准年月日QC年月日执行日期年月日分发部门质量管理部、QC一、目的建立菌落总数检验的标准操作程序，使操作过程规范化。二、适用范围适用于菌落总数的检验操作。三、职责1.检验人员严格按检验操作规程进行检验。2.QC主管监督检查执行情况。四、程序1.范围本方法适用于食品中菌落总数（Aerobicplatecount）的测定2.术语和定义菌落总数：食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养

2、温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。3.设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：3.1恒温培养箱：36℃±1℃，30℃±1℃。3.2冰箱：2℃～5℃。3.3恒温水浴箱：46℃±1℃。3.4天平：感量为0.1g。3.5均质器。3.6振荡器。3.7无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL汉臣氏（沈阳）儿童制品有限公司文件编码第6页共6页刻度）或微量移液器及吸头。3.8无菌锥形瓶：容量250mL、500mL。3.9无菌培养皿：直径90mm。3.10pH计或pH比色管或精密pH试纸。3.11放大

3、镜或和菌落计数器。4.培养基和试剂4.1平板计数琼脂培养基：见附录A中A.1。4.2磷酸盐缓冲液：见附录A中A.24.3无菌生理盐水：见附录A中A.3。5.检验程序菌落总数的检验程序见图1。检样25g(mL)样品+225mL稀释液，均质10倍系列稀释选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液，各取1mL分别加入无菌培养皿内每皿中加入15mL～20mL平板计数琼脂培养基，混匀培养计数各平板菌落数计算菌落总数报告图1菌落总数的检验程序汉臣氏（沈阳）儿童制品有限公司文件编码第6页共6页6.操作步骤6.1样品的稀释6.1.1固体和半固体样品：称取25g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液

4、或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～10000r/min均质1min～2min，或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。6.1.2液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液6.1.3用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品

5、匀液。6.1.4按6.1.3操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。6.1.5根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。6.1.6及时将15mL～20mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。6.2培养6.2.1待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1℃培养48h±2h。水产品30℃±

6、1℃培养72h±3h。6.2.2如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4mL），凝固后翻转平板，按6.2.1条件进行培养。6.3菌落计数可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-formingunits，CFU）表示。6.3.1选取菌落数在30CFU～300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。6.3.2汉臣氏（沈阳）儿童制

7、品有限公司文件编码第6页共6页其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。6.3.3当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数7.结果与报告7.1菌落总数的计算方法7.1.1若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（mL）样品中菌落总数结果。7.1.2若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按