荧光定量PCR检测HBV-DNA载量与HBV-M常见模式相关性探讨

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1、荧光定量PCR检测HBV-DNA载量与HBV-M常见模式相关性探讨梁勇彪区倩萍蒙春华(南宁市第二人民医院检验科广西南宁530031)【摘要】目的：探讨荧光定量PCR检测HBV-DNA载量与乙肝病毒标志物常见模式的关系。方法：回顾性分析同时检测乙型肝炎病毒和荧光定量PCR255例患者，统计HBV–DNA检测含量值和酶联免疫吸附检测的HBV–M模式值，进行对比。结果：53例大三阳标本屮，HBV–DNA阳性47例平均拷贝数为2.25×107/ml;在7例HBsAg、HBeAg标志物阳性的标本中,HBVDNA阳性5

2、例，平均拷贝数5.40×106/ml;在57例小三阳标本»HBV・DNA阳性者为24例,平均拷贝数为7.69×10/ml;W在122例HBV-M标志物全阴性的标本中，仍有3例检HiHBV-DNA阳性,平均拷贝数为4.54×10/mL结论在各种HBV标志物模式中，以HBeAg阳性者的病毒复制水平最高，荧光定量PCR检测HBV・DNA载量可表达HBV感染和复制状态。【关键词】HBV-DNA载量；荧光定量PCR；HBV–M模式；标志物【屮图分类号】R512C文献标识码】A【文章编号】1007-8231(2011)

3、10-1477-02屮国有13亿慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者，是传染性肝炎的高发地区。其屮约有2000万是需要抗病毒治疗的慢性进展性肝病患者［1］。冃前HBVM模式感染复制情况难以判断，实时荧光定量PCR的应甩使HBV-DNA检测得到准确量化，为临床医生对乙肝的诊断、治疗和预后判断提供可靠依据。为进一步了解HBV-DNA定量检测与乙肝患者HBV标志物(HBV・M)Z间的关系,对同步检测乙型肝炎病毒和荧光定量PCR255份血清标本检测结果进行比较和分析如下。1资料与方法1.1标本来源:255例标本均为两年来我院检测HBV-M,并同时做HBV-DNA检测

4、的患者。1.2仪器与试剂:HBV-M:仪器为RT-2100C酶标仪（深圳雷杜）和洗板机（iwo-960Autobio安图）：HH.W21.600S型数显电热恒温水温箱和ZW-A型微量振荡器（金坛市科析仪器有限公司）,HBsAg试剂（上海科华生物工程股份有限公司）。HBV-DNA的检测仪：美国生产的ABI7300型实吋荧光定量PCR仪。试剂盒由广州中山医科大学达安基因诊断中心提供PCRHBV试剂盒。1.3检测方法:HBV-M采用ELISA法,HBV-DNA采用荧光定量PCR技术，严格按试剂盒说明操作并执行质控。1.4统计学处理采用SPSS17.0统计软件包

5、进行数据处理。两样本均数分析采用t检验，P&It;0.05为差异有统计学意义。如表1。2结果255例标本按HBV・M常见模式分为6个类型，分别统计HBV・DNA检测阳性率及HBV-DNA含量，进行结果统计吋，拷贝数<1000的标本不参加均值计算”结果见表结果显示:255例HBV-DNA载量高于1000拷贝/ml血清的病例中有85例。表1255乙型肝炎血清HBV・M模式与HBVDNA定量结果的对比3讨论冋顾性分析同步检测乙型肝炎病毒和荧光定量PCR255例患者，统计HBV–DNA检测含量值和酶联免疫吸附检测的HBV–M模式值，

6、HBV-M阳性133例;HBVDNA阳性85例。其中53例模式1血清标本中检测到HBVDNA阳性48例，检出率达90.57%,模式2中HBVDNA检出率为85.71%明显高于其它各组（P&It;0.05）,显示HBV复制与HBeAg存在某种联系［2］;但,HBeAg阳性组60例中仍有6例（10%）HBVDNA检测结果阴性，亦有可能与E系统检测的试剂质量有关［1］。在57例模式3中‘有24例检出HBVDNA,检出率达42.11%,据导这类乙肝阳性率差异较大，从13%〜63%不等［3］o这可能与HBVDNA检测方法、被研究人群等因素有关。这种类型病人不论是乙

7、肝病毒复制终止，还是复制水平降低”都有一定的传染性［4］。表中第8种模式乙肝标志物全部阴性的122例血清中,HBV-DNA阳性的有3例（2.46%）,可能是HBV-DNA先于其它血清标志物于血中出现，也可能是在部分HBV感染人群中HBsAg呈低水平存在，而采用的ELISA法对这类人群易造成漏检。在各种HBV标志物模式中,以HBeAg阳性者的病毒复制水平最高，荧光定量PCR检测HBV-DNA载量可表达HBV感染和复制状态。荧光定量PCR法灵敏度高、特异性强、结果准确，能反映HBV真实感染和复制状态，对乙肝的治疗方案选择、疗效观察、预后判断具有重要的指导意义

8、。参考文献[1]丁友法，王伟.杂交酶联定量PCR检测HBV-DNA的初步应用[j