10-HDA对UVB诱导人皮肤光老化成纤维细胞胶原代谢的影响

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1、10-HDA对UVB诱导人皮肤光老化成纤维细胞胶原代谢的影响赵旭李续博通讯作者：李续博(黑龙江屮医药大学佳木斯学院，154007)【摘要】不饱和脂肪酸10—疑基一2—癸烯酸又名蜂王酸(10-HDA),是蜂王浆的主要成分，由于其具有抗肿瘤、抗菌活性和刺激胶原蛋白产生的作用，吸引了世界各地对10-HDA药理特性的研究。然而，10-HDA对紫外线(UVB)诱导的皮肤光老化影响却罕有报道。本研究通过测量I型前胶原蛋口(PIP),转化生长因子βl(TGF-βl)和基质金属蛋白酶-l(MMP-l)的变化，检测10-HDA对UVB诱导人正常皮肤成

2、纤维细胞光老化的影响。结果：10-HAD使I型前胶原蛋口和TGF-βl含量增加，但是金属蛋口酶・1的水平并没有改变。因此,10・HDA可能是通过增强胶原蛋白的合成而对UVB诱导的皮肤光老化进行保护。【关键词］10-HAD；MMP-1；光老化；I型前胶原蛋白;TGF-βl中途分类号：R285文献标识码：A前言皮肤老化可以分为内源性老化和外源性老化。外源性老化主要是由紫外线(UV)照射引起的光损伤。UV照射是引起人类皮肤急、慢性疾病的一个主要环境因素，长期暴露在紫外线下导致皮肤过早衰老即光老化，其主要临床表现为皮肤增厚、粗糙、褶皱和斑点

3、色素沉着。研究表明：10-HDA呈剂量依赖性诱导正常人体皮肤成纤维细胞屮胶原蛋口含量增加。然而，10-HDA对UV诱导的皮肤光老化的影响尚未见到报道。在本研究屮我们以UVB照射正常人体皮肤成纤维细胞，以I型前胶原蛋白和MMP1、TGF・βl的含量为检测指标，旨在研究10-HDA对UVB诱导正常人体皮肤成纤维细胞光老化的影响。1材料与方法1.1药品与细胞10-HAD（购于上海超研生物科技有限公司），人皮肤成纤维细胞HSF（购于上海博谷生物科技有限公司）。1.2细胞培养HSF细胞培养于37°C,5%CO2的细胞陪养箱，培养基为10%胎牛血清加1%

4、双抗DMEM培养基，用5-9代细胞做实验。1.3紫外线照射和细胞处理10-HDA用DMSO溶解・20保存备用，HSF接种于40mm培养皿中（2×105细胞/皿）含10%胎牛血清和抗生素DMEM培养基。24小时后，吸出培养基，预热磷酸缓冲盐溶液清洗单层贴壁细胞，加入1ml磷酸盐缓冲液，UVB（144mj/cm2）辐照40秒。UVB灯管5根辐射距离辐射距离7.5厘米。UVB（290-320nm,峰值312nm）灯管辐射能量与辐射计测量用辐射计测量。辐照后，细胞用预热的磷酸缓冲盐溶液清洗，每皿添加无血DMEM培养基各20uL10-HAD浓度为是1

5、、10和100uM,培养72小吋后收集细胞和上清液。1.4形态学变化人工培养的真皮成纤维细胞72小吋后形态的变化，使用倒置显微镜（100倍放大）观察细胞形态。1.5MTT分析。MTT分析是一种常用的、敏感、定量、可靠的测定细胞活力的方法。96孔板加入不同浓度10-HAD（1、10和100uM）,UVB紫外照射后孵育72小时，加AMTT（0.1mg/mL）,继续在37°C5%CO2培养箱中培养2小时，清除培养基加入100微升的二甲亚飒溶解结晶紫甲噥。室温下摇床震荡30分钟之后使用酶标波长为570nm测量。1.6I型前胶原蛋白、金属蛋白酶和TGF-&bet

6、a;l测定培养基中I型前胶原蛋白、金属蛋白酶和TGF-βl的浓度用酶联免疫吸附试剂盒测定，按照试剂盒说明操作并设复孔重复试验三次。1.7统计分析实验数据用SPSS19.0软件进行单因素方差分析（ANOVA）,用L・S・D法对数据进行两两比较。P&t;0.05有统计学意义。2结果2.1UVB照射和10-HAD对人皮肤成纤维细形态变化影响如光学显微镜图所示，UVB照射和治疗10-HDA细胞形态如图，未辐射的细胞如图1所示，辐照40秒细胞如图2所示。UVB辐照后10・HDA治疗组浓度为1、10和100uM,培养72小吋光学显微镜分析显示（图3-5）

7、,可以看出不同浓度的10-HAD都可以预防紫外损伤。2.210-HDA对UVB辐射人皮肤成纤维细胞活力的影响探讨10-HDA对UVB防护作用，我们测量I型前胶原的浓度,I型前胶原是人皮肤成纤维细胞中主要胶原蛋UVB（144mJ/cm2）辐射人类皮肤成纤维细胞培养。使用MTT法测定细胞活力（图6）,未辐射组细胞活力为100%oUVB144mJ/cm2辐照的成纤维细胞在细胞活力比未照射的细胞活力下降大约23%O不同浓度10-HAD对细胞活性具有弱的促进作用，10-HAD对细胞无毒性作用。图6UVB144mJ/cm210-HAD浓度（1、10和100uM）2

8、.310-HDA对UVB辐射人皮肤成纤维I型前胶原的影响图7UVB144mJ/cm210-HA