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1、·10·《上海畜牧兽医通讯》 2003年第3期抗肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌鸡卵黄抗体(IgY)的研究3杨俊兴 牛明福 王川庆译 (河南农业大学牧医工程学院 郑州 450002) 【摘要】通过ELISA试验发现鸡抗肠炎沙门氏菌或抗鼠伤寒沙门氏菌卵黄抗体(IgY)具有很高的特异活性。用冻干的卵黄水溶性组分制成的肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌特异性IgY粉末分别含有15.5%和10%的特异性IgY。抗肠炎沙门氏菌IgY与鼠伤寒沙门氏菌有53.3%的交叉反应,抗鼠伤寒沙门氏菌IgY与肠炎沙门氏菌有42.4%的交叉
2、反应。曾有报道证明沙门氏菌特异性IgY可以抑制沙门氏菌在液体培养基中的生长。肠炎沙门氏菌在含有鼠伤寒沙门氏菌特异性IgY的培养基中培养4～6小时的生长速率比对照组少4倍。通过细菌计数发现鼠伤寒沙门氏菌在含有特异性IgY培养基中培养6个小时后的数量比对照组少1.6cfuöml。用免疫荧光技术和免疫电镜技术对IgY的特异结合活性作进一步的研究,发现沙门氏菌特异性IgY能够结合沙门氏菌表面的抗原上,并导致细菌表面结构改变。 关键词:IgY,肠炎沙门氏菌,鼠伤寒沙门氏菌,抗菌活性,免疫荧光和免疫电镜技术 鸡卵黄
3、抗体,系指免疫球蛋白Y(IgY),在结构和免疫特应用Akita和Nakai建立的水稀释法来制备水溶性组分。性方面有别于哺乳动物的IgG,它还具有一些哺乳动物IgG与卵清分离的卵黄,首先与8倍体积冷灭菌蒸馏水(pH为4.0)不具有的优点,如IgY在不同理化环境下的稳定性和IgY适轻轻混匀,再用pH为2.0的冷蒸馏水补充到终浓度为1∶10。合用作免疫学工具等。应用简单的方法就可以从鸡蛋黄中生混合后,调pH至5.0～5.2,置4℃12小时。然后于4℃以3125产出大量的IgY,而且还不会伤及动物。由于IgY可能作
4、为g离心20分钟,收集水溶性组分,-20℃保存备用。用ELISA传统的哺乳动物IgG的替代品,因此IgY已引起人们更多的检测后,将含有高活性的特异IgY或非特异性IgY的水溶性组注意。分用0.1NNaOH中和后冻干。对IgY干粉进行蛋白质浓度、总IgY的抗菌特性已成为IgY研究中主要兴趣之一。很多IgY浓度和特异性IgY浓度分析。报道指出IgY在体内防止细菌感染和排菌方面具有免疫功1.4ELISA试验能。结合到细菌上的抗体是其发挥抗菌特性的基础。因此,有用Sunwoo建立的ELISA方法并稍加改进对制备的水
5、必要对IgY的结合活性及它对细菌的影响作更详细的研究,溶性组分和IgY干粉进行分析。从而探索IgY抗菌性的本质。1.4.1IgY的特异活性:检测IgY与细菌和特异结合活性由于肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌是人和鸡沙门氏的方法如下:用150Ll用碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液稀释的肠菌病的主要病原菌,因此,选择这两个血清型的沙门氏菌作炎沙门氏菌(1.67mg细菌öml,10Lg蛋白öml)或鼠伤寒沙门为抗原来刺激鸡产生IgY。体内研究已表明IgY对沙门氏菌氏菌(1.11mg细菌öml,10Lg蛋白öml)包被微孔板,将
6、含特的感染有预防作用。然而,IgY抗沙门氏菌的结合活性方面异性IgY或非特异性IgY水溶性组分作为对照,用PBS稀的免疫学特性还未见报道。因此,本研究的目的是用包括释1000倍后分别加150Ll与所包被抗原反应,加入150Ll辣ELISA、生长抑制试验、显微镜检技术等不同的实验方法来根过氧化物酶标记的兔抗鸡IgG(用PBS1∶1000稀释)和研究抗肠炎沙门氏菌和抗鼠伤寒沙门氏菌IgY的特异性和新制备的底物溶液。在酶标仪上于405nm处读取最大吸光结合活性,从而研究其免疫学特性。值。1 材料与方法1.4.2I
7、gY的交叉反应性:用上述ELISA方法及下列菌体1.1 细菌和培养条件检测IgY的交叉反应性。分别用150Ll碳酸盐-碳酸缓氢盐肠炎沙门氏菌(ESO9325-92)和鼠伤寒沙门氏菌由加冲液稀释的肠炎沙门氏菌(1.67mgöml)、鼠伤寒沙门氏菌拿大亚伯达省埃得蒙顿亚伯达农业食品和农村发展中心、动(1.67mgöml)、E.coliO157:H7(0.31mgöml)、和E.coli987P物保健实验室提供。用TSB培养基培养细菌并离心收集细(0.5mgöml)包被微孔板,均加入倍比稀释后的肠炎沙门氏菌,用福
8、尔马林灭活后于-20℃保存备用。菌IgY粉末(40～10Lgöml)和鼠伤寒沙门氏菌IgY粉末(641.2 鸡的免疫～16Lgöml)与所包被的抗原反应。通过比较抗肠炎沙门氏菌按照加拿大动物保健委员会制订的动物保健指南中的和抗鼠伤寒沙门氏菌IgY对各自本型菌及所选用的4种细标准饲养实验鸡。用Sanwoo等报道的方法对鸡群免疫。冻菌和结合活性来研究IgY的交叉反应性。干的肠炎沙门氏菌(500Lg细菌öml,3.5L
