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1、中华人民共和国国家标准GB/T12399一1996食品中硒的测定代替G131239990Determinationofseleniuminfoods范围本标准规定了用荧光法和氢化物原子荧光光谱法测定食品中硒的方法本标准适用于各类食品中硒的测定第一篇荧光法(第一法)2原理祥品经混合酸消化后，硒化合物被氧化为四价无机硒(Se")，与2,3一二氨基蔡(2,3-diaminona曲thalene.简称DAN)反应生成4,5-苯并韭硒脑(4,5-benzopiaselenol)，其荧光强度与硒的浓度在一定条件下成正比用环己烷萃取后于激
2、发光波长376n-，发射光波长520am处测定荧光强度，与绘制的标准曲线比较定量本方法检出限为3ng3试剂3.，环己烷。3.2硝酸。3.3过诚酸3.4盐酸。3.5氢澳酸。3.6(1+9)盐酸溶液:取10MI.盐酸，加90mL水。3.7(1+1)氨水。3.8(5+95)去硒硫酸:取5ml，去硒硫酸，加于95m1水中。去硒硫酸取200mL硫酸，加于200ml一水中，再加30mL氢澳酸，混匀，置沙浴上加热蒸去硒与水至出现浓白烟，此时体积应为200MI。3.90.2mot/I.EDTA:称37gEDTA二钠盐，加水并加热溶解，冷却后
3、稀释至500mi。3.1010%盐酸轻胺:称取10g盐酸羚胺溶于水中，稀释至100ml3.11混合酸:硝酸+过氯酸(2+1).3.120.1002,3---.氨基蔡(纯度95%-98%):需在暗室配制。称取200mgDAN于一带盖二角瓶中，加入200mI,O.1mot八盐酸，振摇约15min，使其全部溶解。约加40ml环己烷，继续振摇5min，将此液转入分液漏斗中，待溶液分层后，弃去环己烷层，收集DAN层溶液。如此用环己烷纯化DAN直至环己烷中的荧光数值降至最低时为止(纯化次数视DAN纯度不同而定，一般约需纯化3-4次)将提
4、纯后的D八N溶液储于棕色瓶中，约加1cm厚的环己烷覆盖溶液表面。置冰箱中保存。必要时再纯化一次3门3晒标准溶液中华人民共和国卫生部1996一06一19批准1996一09-01实施cs/T12399一19963.131硒标准储备液(1001,g/ml):精确称取100.0mg元素硒(光谱纯)，溶于少量硝酸中，加2mL过抵酸，护货沸水浴中加热3-4h,冷却后加入8.4ml盐酸，再置沸水浴中煮2min。准确稀释至1000nil，其盐酸浓度为。.1mol/l一此储备液浓度为100p.g/mL.3.13.2A标准使用液(。.05pg/
5、ml)将3.13.1液用0.1mol/1盐酸稀释.使含硒为0.05pg/ml。于冰箱,1,保fi-3.140.02"甲111f指示剂:称取50mg甲酚红溶f水中，加(t1+1)氨水1滴，待甲酚红完全溶解后加水稀样至250In1,}3.15EIPhA棍含液:取0.2mot/l的EDTA(3.9)和10%盐酸释胺(3.10)液各50mL,混匀，再加几mL(3.刊〕济液.用水稀释至1工4仪器和设备4.1’炙验室’常用设备4.2荧光分光光度计5分析步骤5.1样品处理及消化5门1粮食:样品用水洗三次，于60C烘干，用不锈钢磨磨成粉，储
6、于塑料瓶内，放一小包樟脑精，盖紧盖保存，备用。5.1.2蔬菜及其他植物性食物取可食部分用水冲洗三次后用纱布吸去水滴，用不锈钢刀切碎，取混合均匀的样品1'60C烘干，称重，粉碎，备用。5.1.3称取0.5~2.0g样品(含硒量0.01^0.5pg)于磨口三角瓶内，加10ml-(5+95)去硒硫酸，样品湿润后，再加20mL混合酸液放置过夜。次日于沙浴上逐渐加热，当激烈反应发生后(溶液变无色)，继续加热至产生白烟，溶液逐渐变成淡黄色即达终点。某些蔬菜样品消化后常出现浑浊，难以确定终点，所以要细心观察。还有含硒较高的蔬菜含有较多的S
7、e'+,需要在消化达到终点时冷却后加10m1,(1+9)盐酸.继续加热，使Se,I还原成Se"。按上述方法确定终点。52}则定1`样品消化液中加20ml.EDTA混合液.用氨水(1+1)或盐酸调至淡红橙色(pH1.5-2.0)。以下步骤陀暗室进行加3mLDAN试剂，混匀，置沸水浴中煮5min，取出立即冷却，加3mL环己烷，振摇一lnun，将全部溶液移入分液湍斗，待分层后弃去水层，环己烷层转入带盖试管中，小心勿使环己烷中混入水滴，于激发光波长376nm.发射光波长520nm处测定蜚硒脑的荧光强度。5.3硒标准曲线绘制:准确吸取
8、硒标准使用液0,0.2,1.0,2.。及4.0mL，加水至5MI，按样品测定步7`同时进行。硒含量在0.5产9以下时荧光强度与硒含量呈线性关系，在常规测定样品时，每次需做试剂自与样品硒含量相近的标准管(双份)即可。结果61计1)‘m,‘m_12式中:X一一样品中硒含量,Rg/g;八一标准管
