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《GB-T5009.118-2003小麦中T-2毒素的酶联免疫吸附测定(ELISA)》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、免费标准网(www.freebz.net)标准最全面ICS67.040C53中华人民共和国国家标准GB/T5009.118-2003代替GB/T14933-1994小麦中T-2毒素的酶联免疫吸附测定（ELISA）DeterminationofT-2toxininwheatwithenzyme-linkedimmunosorbentassay（ELISA)2003-08-11发布2004-01-01实施中华人民共和国卫生部＊＊中国国家标准化管理委员会认一IJ免费标准网(www.freebz.net)无需注册即可下载免费标准网(www.
2、freebz.net)标准最全面GB/'I'5009.118-2003oli舀本标准代替GB/T14933--1994《小麦中’r2毒素的酶联免疫吸附测定方法（ELISA);o本标准与GB/T14933-1994相比上要修改如下：一修改了标准的中文名称，标准中文名称改为《小麦中T-2毒素的酶联免疫吸附测定（ELISA)>);—按GB/T20001.42001(标准编写规则第4部分：化学分析方法》对原标准的结构进行了修改。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准起草单位：p生部食品一卫生监督检验所。本标准主要起草人：阳传和、罗雪
3、云、计融。原标准于1994年首次发布，本次为第一次修订。免费标准网(www.freebz.net)无需注册即可下载免费标准网(www.freebz.net)标准最全面GB/T5009.118-2003小麦中T-2毒素的酶联免疫吸附测定（ELISA）范围本标准规定了小麦中T-2毒素的酶联免疫吸附测定方法（ELISA)o本标准适用于小麦及其制品中T-2毒素的测定。本方法的检出限为1pg/kgo第一法间接法2原理将已知抗原吸附在固相载体表面，洗除未吸附抗原，加人一定量抗体与待测试样（含有抗原）提取液的混合液，竞争温育后，在固相载体表面形成
4、抗原一抗体复合物洗除多余抗体成分，然后加人酶标记的抗球蛋自的第二抗体结合物，与吸附在固体表面的抗原一抗体复合物相结合。再加人酶的底物。在酶的催化作用下，底物发生降解反应，产生有色产物，通过酶标检测仪，测出酶底物的降解量，从而推知被测试样中的抗原量。3试剂3.1甲醇3.2石油醚。3.3竺氯甲烷。3.4无水乙醇。3.5乙酸乙酉旨。3.6二甲基甲酞胺。3.7四甲基联苯胺(FMB)o3.8吐温20。3.930％过氧化氢(30Y)H,(.)-,)3.10抗体：杂交瘤细胞系1D7产生的抗I'-2毒素的特异性单克隆抗体。3.11抗原：T-2毒素与
5、载体蛋自一牛血清白蛋白（BSA）的结合物。3.12兔抗鼠免疫球蛋白与辣根过氧化酶的结合物（酶标二抗）。3.13ELIS八缓冲液系统。3.13.1包被缓冲液为pH9.6的碳酸盐缓冲液，称取1.59g碳酸钠（Na_C()),2.93g碳酸氢钠(Nal-l(.'(）一），加水稀释至1000MI。3.13.2洗液为含0.0％叶温一2。的pH7.1的磷酸盐缓冲液（简称为ISS-"I'),配制方法为：称取0.2g磷酸二氛钾（KH,,P(),),2.，g磷酸氢二钠(Na_HPO,·(2H,()).8.0g氯化钠（NaCI),。．2g氯化钾（KC1
6、),0.5rnI、口土温-20，力GI水至1000nil3.13.3底物缓冲液为p115.。的磷酸一柠檬酸缓冲液，配制方法为：〔）｝cool;I柠檬酸（C16He07·H（）），即称取柠檬酸19.2g，加水至1。（）（）Till，为甲液；0.2niol;'I磷酸氢二钠（'Va,HP(),),即称取磷酸氢二钠71.7g，加水至1000nil，为乙液：免费标准网(www.freebz.net)无需注册即可下载免费标准网(www.freebz.net)标准最全面GB/T5009.118-2003取甲液24.3ml,，乙液25.7ml-，加
7、水至100ml,，即可。3.13.4底物溶液：取50川公TMB(10mg"I'MB溶于1ml,二甲基甲酞胺中）溶液十10mL底物缓冲液＋10fiL30％过氧化氢，混匀。3.14"I'-2毒素标准溶液用甲醇配成1mg/ml-T-2毒素贮备液，20℃冰箱贮存。于检测当天，精密吸取贮备液，用20/0/0甲醇的PBS(配制方法同PBS-T，不加吐温-20即可）稀释成制备标准曲线的所需浓度。4仪器所有玻璃器皿均用硫酸洗液浸泡，用自来水、蒸馏水冲洗。4.1酶标检测仪。4.2酶标板（4(）孔或96孔）。4.3电动振荡器。4.4电热恒温水浴锅4.5
8、具0.2ml.尾管的10MI＿小浓缩瓶。5分析步骤5．，提取称取20g粉碎并通过20目筛的试样，置200ml具塞锥形烧瓶中，加8nil，水和100ml，三氯甲烷一无水乙醇(4+1)，密塞，振荡11)，通过滤纸过滤，取25mL滤液于蒸发
