实验室微生物鉴定常见生化反应及应用价值

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1、实验室微生物鉴定常见生化反应及应用价值明胶液化试验(1)原理：某些可以产牛一•种胞外蛋白水解酚(明胶腮)，能使明胶分解为氨基酸，使明胶失去凝固能力而液化，因而使半固体的明胶培养基成为流动的液体。(2)方法：将待检菌接种于明胶培养基中，22°C培养7d或更长时间，每天观察结果冇无凝固。(3)结果：如无凝固，则表示明胶已被水解，液化试验阳性。如凝固，则继续培养。(4)应用：肠杆菌科细菌的鉴别，如奇异变形杆菌、普通变形杆菌、沙雷菌属和阴沟肠杆菌等到能液化明胶，肠杆菌科中的其它细菌很少液化明胶。有些厌氧菌如产气英膜梭

2、菌、脆弱类杆菌等也能液化明胶。另外，许多假单胞菌也能产住明胶酶而使明胶液化酬味试验(靛基质试验)(1)原理：某些细菌具有色氨酸酶，能分解蛋白丿冻水中的色氨酸产生口引味，当加入呵味试剂(対二甲氨基苯甲醛)后则形成红色的玫瑰卿味。(2)培养基：蛋口豚水培养基。(3)方法：将待检菌接种于富含色氨酸的蛋白月东水培养基中，35°C孵育24~48h,沿试管壁慢慢加入眄I味试剂，观察结果。(4)结果：于两液面接触处出现红色为阳性，无色为阴性。(5)应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定，如大肠埃希菌与产气肠杆菌，肺炎克雷伯菌和产

3、酸克雷伯菌等的鉴别。硫化氢试验(1)原理：某些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸产生硫化氢，硫化氢遇亚铁离子或铅离子则结合形成黑色沉淀物(硫化铁或硫化铅沉淀)。(2)培养基：醋酸铅培养基。(3)方法：将待检菌穿刺接种于醋酸铅培养基中，于35°C孵育24h・48h,观察有无黑色沉淀出现。(4)结果：培养基变黑为阳性，不变为阴性。(5)应用：主要用于鉴別肠杆菌科中属及种的鉴別，如沙门菌属、枸椽酸杆菌丿瓜、变形杆菌属、爱徳华菌属等为阳性,其它菌属人多为阴性。但沙门菌属小亦有部分硫化氢阴性菌株，如甲型副伤寒、仙台、猪隼乱

4、沙门菌等。尿素分解试验(1)原理：某些细菌具有球素分解酶，能分解冰素产生人量的氨，使培养基呈碱性。(2)培养基：尿素培养基。(3)方法：将待检菌接种于尿素培养基，于35°C孵育18-24h小时观察结果。(4)结果：培养基呈碱性，使酚红指示剂变红为阳性，不变为阴性。(5)应用：主要用于肠杆菌科中变形杆菌属细菌的鉴定。奇异变形杆菌和普通变形杆菌腺酶阳性，另外雷氏普罗威登菌和摩根菌为阳性，而斯氏和产碱普罗威登菌阴性。苯丙氨酸脱氨酶试验(1)原理：测定细菌是否产牛苯丙氨酸脱氨酶。细菌产牛的苯丙氨酸脱氨酶使苯丙氨酸脱氨

5、后生成苯丙酮酸，加入氯化铁试剂后产生绿色反应。(2)培养基：苯内•氨酸琼脂培养基。(3)方法：将待检菌大量接种入苯丙氨酸琼脂培养基小，35°C孵育18~24h,滴加10%三氯化铁试剂3~4滴，口斜面上方流下。(4)结果：有绿色出现为阳性。应立即观察结果，延长反应时间会引起退色。(5)应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。变形杆菌属、普罗威背菌属、摩根菌属均为阳性，肠杆菌科其它细菌均为阴性。氨基酸脱竣酶试验(1)原理：某些细菌可产牛氨基酸脱竣酶，能分解氨基酸使其脱竣生成胺和二氧化碳。由于胺的牛成使培养基变为碱性，可

6、用指示剂指示出來。(2)培养基：氨基酸脱竣酶培养基和氨基酸对照培养基。(3)方法：将待检菌分别接种于1支氨基酸(赖氨酸，鸟氨酸或精氨酸)脱竣臨试验管和1支氨基酸脱竣酶对照管(无氨基酸)，各覆盖至少0・5cm高度的无菌石蜡汕，35°C孵育l~4d,每日观察结果。(4)结果：对照管应为黄色，若为滉甲酚紫指示剂，则测定管呈紫色则为阳性，若测定管呈黄色为阴性。若对照管呈现紫色则试验无意义，不能做出判断。(5)应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴别。如沙门菌属中除伤寒和鸡沙门菌外，其余沙门菌的赖氨酸和鸟氨酸脱竣酶均为阳性。志

7、贺菌属除宋内和鲍氏志贺菌外，其他志贺菌均为阴性。碳源和氮源利用试验是细菌对单一來源的碳源利用的鉴定试验。在枸椽酸盐培养基中，细菌只有利用枸椽酸盐作为碳源，分解生成碳酸钠便培养基变碱性，pH指示剂澳麝香草酚蓝由淡绿色变为深蓝色。常用的试验方法有枸椽酸盐利用试验、丙二酸盐利用试验。枸椽酸盐利用试验(i)原理：某些细菌能利用枸椽酸盐作为唯一碳源，而在此培养基上牛长，并分解枸椽酸盐生成碳酸钠，使培养基变碱性。(2)培养基：枸椽酸盐培养基。(3)方法：将待检菌接种于枸椽酸盐培养基上，置35°C孵育l~4d,逐日观察结果

8、。(4)结果：若用漠麝香草酚兰指示剂，斜面出现菌落或菌苔，培养基由淡蓝色变蓝色为阳性;不能利用枸椽酸盐作为碳源的细菌，在此培养基上不能生长，培养基不变色，仍为绿色为阴性。(5)应用：用于肠杆菌科中菌属间的鉴定。在肠杆菌科屮埃希菌属、志贺菌屈、爱徳华菌属和耶尔森菌属均为阴性，沙门菌属、克雷伯菌属通常阳性。丙二酸盐利用试验(1)原理：某些细菌能利用丙二酸盐作为唯一碳源，丙二酸盐被分解生成碳酸钠，使培养基