小花玄参中总皂苷的定性定量分析

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1、小花玄参中总皂苷的定性定量分析摘要：采用化学试剂法和分光光度法对小花玄参（ｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａｓｏｕｌｉｅｉｆｒａｎｃｈ．）中总皂苷成分进行定性、定量分析。以菝葜皂苷元为对照品，于３１１ｎｍ处比色测定，测得小花玄参中总皂苷含量为１１．０５ｍｇ／ｇ，平均回收率为９７．５％，ｒｓｄ为１．５９％（ｎ＝６），该测定方法简便、准确，稳定性、重现性好。关键词：小花玄参（ｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａｓｏｕｌｉｅｉｆｒａｎｃｈ．）；总皂苷；定性分析；定量分析ａｂｓｔｒａｃｔ：ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅａｎｄｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｏｔａｌｓａｐｏｎｉｎｓ

2、ｉｎｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａｓｏｕｌｉｅｉｆｒａｎｃｈ.wasconductedｂｙｍｅａｎｓｏｆｃｈｅｍｉｃａｌａｎａｌｙｓｉｓａｎｄｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ.accordingtoa311nmofsampletestedusingｓａｒｓａｓａｐｏｇｅｎｉｎａｓｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓｕｂｓｔａｎｃｅ．ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｔｏｔａｌｓａｐｏｎｉｎｓｗａｓ１１．０５ｍｇ／ｇｉｎｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａｓｏｕｌｉｅｉｆｒａｎｃｈ..tｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｙｒａｔｅｗａｓ９７．５％；ａｎｄｒｓｄｗａｓ１．５９％（ｎ＝６）．ｔｈｅｍｅｔｈ

3、ｏｄｓｗｅｒｅｓｉｍｐｌｅａｎｄａｃｃｕｒａｔｅ，ｗｉｔｈｅｘｃｅｌｌｅｎｔｓｔａｂｉｌｉｔｙａｎｄｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙ．ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａｓｏｕｌｉｅｉｆｒａｎｃｈ；ｔｏｔａｌｓａｐｏｎｉｎｓ；ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅａｎａｌｙｓｉｓ；ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅａｎａｌｙｓｉｓ小花玄参（ｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａｓｏｕｌｉｅｉｆｒａｎｃｈ．）属玄参科（ｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａｃｅａｅ）玄参属细弱小草本，为我国特有种，产于四川西部、青海东部和甘肃东南部。玄参科植物中含有皂苷类成分，主要为甾体皂苷，由此推测小花玄参中含有甾体皂苷。

4、皂苷具有多种药理学功能，如抗炎、抗肿瘤等［１］。因此，有必要对小花玄参中的皂苷进行研究。本研究通过化学试剂法和分光光度法对小花玄参中总皂苷成分［３］进行定性［２］和定量测定，为总皂苷的快速定性定量分析提供参考。１材料与方法１．１材料ｈｈ－４数显恒温水浴锅（常州国华电器有限公司），ｒｅ５２８５ａ旋转蒸发器（上海亚荣生华仪器厂），ｔｕ－１２２１型紫外分光光度计（北京普析通用有限公司），索氏提取装置。对照品：菝葜皂苷元（中国药品生物制品检定所）；供试样品：小花玄参茎叶（２０１１年７月采于青海省玉树州代格村农作物地，中科院西北高原生物研究所鉴定）；所用试剂均为分析

5、纯。１．２方法１．２．１供试品溶液的制备称取０．５ｇ小花玄参茎叶粉末（１００目），精确到０．０００１ｇ，置于索氏提取器中，加适量石油醚脱脂１ｈ，冷却后，倾出石油醚提取液，残渣蒸干后加入甲醇１００ｍｌ，提取至无色，回收减压至干，加蒸馏水１０ｍｌ溶解，用饱和正丁醇萃取４次（１５、１０、１０和１０ｍｌ），合并正丁醇部分，减压回收至干，加２０ｍｌ２ｍｏｌ／ｌhcl，水浴回流３ｈ后冷至室温，用氯仿萃取３次，２０ｍｌ／次，合并氯仿提取液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转至２５ｍｌ容量瓶中，定容，制得供试品溶液。１．２．２定性检识①醋酐－浓硫酸（ｌｉｅｂｅｒｍａｎｎ－ｂｕｒｃｈ

6、ａｒｄ）检测：取供试液２ｍｌ，沸水浴上蒸干，加入浓硫酸－醋酐（１∶２０，v/v）数滴，观察颜色变化情况；②三氯醋酸检测：将供试液滴在滤纸上，喷洒２５％（ｍ／ｖ）三氯醋酸－乙醇溶液，加热并观察６０℃和１００℃时颜色变化情况；③氯仿－浓硫酸（ｓａｌｋｏｗｓｋｉ）检测：将供试液水浴蒸发所得样品溶于氯仿后加入浓硫酸，观察氯仿层和硫酸层颜色和荧光。１．２．３对照品溶液的制备称取７．５ｍｇ菝葜皂苷元对照品以甲醇定容于２５ｍｌ容量瓶中，配制成０．３ｍｇ／ｍｌ的对照品溶液。１．２．４测定波长选择分别精密吸取对照品溶液０．２ｍｌ、供试品溶液０．１ｍｌ置１０ｍｌ具塞试管中，挥

7、尽溶剂，加入５ｍｌ高氯酸，７０℃水浴１５ｍｉｎ，冰水冷却后，在２１０～４５０ｎｍ范围内扫描，取最大吸收波长为检测波长。１．２．５标准曲线制备精密吸取不同体积的对照品溶液于１０ｍｌ具塞试管中，挥干后加入５ｍｌ高氯酸，于７０℃水浴１５ｍｉｎ，冰水冷却，最大吸收波长处测定吸光度，以浓度为横坐标（ｃ），吸光度为纵坐标（ａ），绘制标准曲线。１．２．６精密度试验取对照品溶液４．０ｍｌ，以甲醇调零，在最大吸收波长处测定吸光度，重复测定６次。１．２．７稳定性试验取供试品溶液０．６ｍｌ，定容至１０ｍｌ，间隔１０ｍｉｎ测定吸光度，重复测定６次。１．２．８重复性试验精密称取５份

8、同一供试样品，同上方法处理，测定吸光度。１．２．９加标回收试验称取