冰冻切片的制作体会

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1、万方数据江西医学院学报2009年第49卷第3期ActaAcademiaeMedicinaeJiangxi2009,Voi49,N—o3·21·冰冻切片的制作体会章克萍8，龙飞3，周莹6(南昌大学医学院a．组织胚胎实验室；b．组织胚胎教研室，南昌330006)关键词：冰冻切片；制作方法；体会中图分类号：R361+．2文献标识码：B文章编号：1000一2294(2009)03一0021--01冰冻切片是在低温恒冷条件下，使组织迅速冷冻达到一定硬度制成的切片，具有速度快、方便的特点。冰冻切片病理诊断iF成为手术过程中确定肿瘤性质，指导临床医生决定手术

2、方案的一种快速而又可靠的手段。因其组织不需经任何处理，组织没有收缩，容易保持牛活的原有形态，尤其在免疫组织化学染色中，能较好地保存细胞抗原的免疫性，组织中的脂类、酶、糖、抗原等化学成分不会受到影响而得以保存[“，适用于显示脂类，酶、糖原、抗原抗体等的检测。但制作冰冻切片比普通行蜡切片要求高，难度大，组织冷冻程度难以掌握，一般切片时容易碎裂，不容易切成薄片，染色时易脱片等许多因素影响切片的质最，从而影响实验的观察和分析。如何快速有效地制作好冰冻切片是组织和病理学技术人员面临的重要问题。作者经过多年的实验摸索，将在冰冻切片制作过程中的一些体会总结如

3、下。1材料和方法1．1材料德国LEICA公司产的I，EICA一1720型恒冷切片机及切片刀；新鲜组织：胃、食管、肾、肝，心肌、皮肤、脾、淋巴结、小肠、卵巢、脑等组织。1．2制作方法取新鲜组织块，摘去不必要的脂肪组织(组织标本不能浸入盐水或洒精中，取材时不能用生理盐水或水冲洗，器材也要干燥，避免发生冰晶。引起细胞变形)，根据所需切成适当体积的组块，经过液氮迅速冷冻后，或直接置包埋托上，喷上普通胶水或OCT包埋剂(作者多采用不同浓度的普通胶水包埋，大组织或质地硬的组织如：心肌、脾、淋巴结、肾等用浓度稀一点的胶水，小组织或质地软的组织如：脑、小肠、卵

4、巢、胃、食管等用浓度稠一点的胶水，经济实惠，包埋效果好)，然后置冷冻台上，在冰冻切片机内速冻2rain左右进行切片，冷冻台的温度控制为一25～一30℃。切片刀最佳温度为一23～一25℃，依组织大小、质地而定，切片前一定要调整好防卷板与切片刀的角度。作者的经验是防卷板与切片刀的角度为5。左右较理想。切下的切片用干净涂有黏附剂(铬明矾液)的载玻片直接吸附贴片，粘贴时载玻片与切片刀上的组织粘贴速度要快，否则时间长会有皱折。冷冻切片厚度一般为3～5肛m，用电吹风吹干后，入95％酒精95mL+冰醋酸5mL固定1～2rain．自来水稍洗后，再用电吹风吹干，

5、于预先加热到37℃温Harris氏苏木精染液中染色2rain左右，水洗后0．5％盐酸酒精分化5s。再用温自来水(37℃左右)蓝化后，入37℃复制伊红染液中染色1rain，上行递度酒精(70％、80％、95％、100％)加温到37℃左右逐级脱水，电吹风吹干，不用二甲苯透明，中性树胶直接封周即可。2结果以上方法进行快速冰冻切片，方法简单、制作时间短。一般从取材到切片封固只需要12～15rain左右，切片完整，厚薄均匀，无冰晶裂隙，无脱片现象，组织细胞形态结构清晰分明，胞核显鲜明的蓝色，细胞质染成粉红色，颜色对比鲜艳。组织染色理想，切片质量优良，在于

6、免疫组织化学染色中。能较好地保存细胞抗原的免疫性，组织中的脂类、酶、糖、抗原等化学成分不会受到影响而得以保存。3讨论冰冻切片原理是通过快速冷冻使组织中的水分结冰变硬n2]。包埋剂起托起组织和黏固组织的作用，将组织固定在标本托上短时间内冻好进行切片。所以冰冻切片质量的保证，除了切片刀刃锋芒外，对组织的冷冻程度很关键，过硬或冷冻不够都切不出优质的切片，只有冷冻到适宜组织块切片程度时，迅速切片，才能切出完好的切片。针对不同器官的组织、组织的大小、质地不同，应采取不同的冰冻切片温度和不同的处理方法[3-5]。(1)为了避免发生冰晶。组织标本不能浸入盐水

7、或酒精中，取材时不能用生理盐水或水冲洗，器材要干燥，因为取材时组织带有水分会引起细胞间针状裂隙，导致正常结构改变。为防止冰晶的形成，除上述外，切片机内冰冻台温度要适宜，一般控制在一25～一30℃，冷冻时间最好为10min左右，冷冻时间过长，切片呈碎屑或条痕状，尤其是质地硬的组织。时间过短，切片呈粥糜状或切不出片。贴片后立即用电吹风吹干后人固定液同定1～2min，再吹干，尽量避免缓慢冷冻造成过多的冰晶形成。(2)包埋剂常用进口OCT、纯胶水或稀释胶水。目前经常用进口OCT较好，但昂贵，作者经多年使用发现胶水包埋效果很好，而且有资料也报道胶水与OC

8、T有相似的物理特性[‘]，可代替进口OCT，经济实惠；节省制作成本。(3)把握最佳切片温度，组织在冷冻过程中，先从周边开始变白，最后中央透明消失，这时