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1、中国抗生素杂志2003年3月第28卷第3期137文章编号:10018689(2003)03013704利福霉素B发酵工艺研究1,22213孟根水孙新强金一平裘娟萍金志华(1浙江工业大学药学院,杭州310032;2浙江医药股份有限公司新昌制药厂,新昌312500;3浙江大学材料与化工学院生物工程研究所,杭州310027)摘要:研究温度、溶氧、巴比妥、磷酸盐及补料方式对利福霉素B发酵的影响。结果表明在控制培养温度27、溶氧25%以上的条件下,采用流加补料工艺,利福霉素B的发酵效价较原工艺有明显
2、提高,此工艺已3在60m发酵罐中进行工业化生产,发酵效价比原生产工艺提高了一倍以上。关键词:利福霉素B;发酵;工艺中图分类号:TQ920.6文献标识码:A利福霉素(rifamycins)属于安莎类抗生素,由地中15L自动发酵罐培养条件通过11(vvm);搅拌海拟无枝酸菌(Amycolatopsismediterranei)产生。广转速500r/min;接种量10%;培养温度0~130h:泛应用于结核病、麻风病等分枝杆菌感染的治疗。30;130h~放罐:28。3抗生素发酵水平的提高,主要依赖于菌种选育及60m发酵罐培
3、养条件培养温度27,通气培养基和培养条件的优化。利福霉素通过菌种选育获107vvm,罐压005MPa,搅拌转速130r/min,接种量[1,2]得高产菌株从而提高生产水平已有报道。新昌制10%,培养时间9d。药厂的利福霉素B产生菌通过推理选育获得的突变1.4补料控制株,生产能力已提高了一倍,但在原发酵工艺中不能体在发酵培养80h左右,当还原糖低于30时开始现出应有的优势。本文通过对利福霉素B发酵培养补入葡萄糖,控制还原糖浓度在10%~15%。当基和培养条件优化,找到一条适合该高产菌种规模化pH在64时,自动补入氨水,控制p
4、H在64左右。发酵的生产工艺,从而提高利福霉素B的生产水平。流加补料依据发酵液中还原糖的含量和补料糖1材料和方法的浓度,设定每小时的补料量,以匀速自动补入,控制1.1菌种发酵液中还原糖在10以上。地中海拟无拟酸菌(Amycolatopsismediterranei)分批补料依据发酵液中还原糖的含量和补料糖XC301,浙江医药股份有限公司新昌制药厂提供,该的浓度,采用每隔6h补一次葡萄糖,控制还原糖在菌种已经多次诱变处理。10以上。1.2材料1.5分析方法[3]种子培养基(%)葡萄糖15,黄豆饼粉10,淀1.5.1
5、还原糖的测定斐林试剂法。[3]粉15,蛋白胨10,KH2PO4005,KNO301,CaCO31.5.2氨基氮的测定甲醛法。02,泡敌004。1.5.3菌丝浓度的测定取发酵液10ml于离心沉淀发酵培养基(%)葡萄糖100,蛋白胨10,黄豆管中,在4000r/min,测沉淀物在发酵液中的比例即得饼粉10,鱼粉05,巴比妥纳015,KNO308,菌丝浓度。[4]KH2PO4002,CaCO303,CoCl21g/ml,泡敌004。1.5.4发酵效价的测定分光光度法。1.3培养条件1.5.5pH
6、的测定用pH电极测定。发酵瓶培养条件培养温度为30,装量250ml1.5.6溶氧的测定用溶氧电极在线测定。三角瓶装25ml,摇床转速220r/min,接种量5%,培养2结果与讨论时间7~8d。2.1温度对利福霉素B发酵的影响收稿日期:20020222作者简介:孟根水,男,生于1970年,硕士,工程师。138利福霉素B发酵工艺研究孟根水等在15L发酵罐中研究了温度(27、25、30)条件下,基本不产利福霉素B;溶氧高于25%时,对利对利福霉素B发酵的影响,结果见Tab.1。结果表明福霉素B的生物合成基本没有影响,
7、说明只需控制溶培养温度27对利福霉素B发酵最有利,其发酵效价氧在25%以上即可满足利福霉素B菌丝生长和产物比原工艺(30)提高了43%,而在25下发酵,发酵合成的需要。因此利福霉素B的发酵过程中最低溶效价很低,同时糖利用也很慢。氧应控制在25%以上,以此来确定发酵罐的通气量和搅拌功率。Tab.1InfluenceoftemperatureonrifamycinB2.3巴比妥对利福霉素B生物合成的影响fermentation巴比妥钠能刺激利福霉素B的生物合成,一般认TemperatureReducedsugarpHProducti
8、vity为巴比妥钠对利福霉素B的刺激作用是诱导现象[5]。()(%)(%)采用在基础料中不加巴比妥钠及培养24h补加与原配255.86.828.6方等量的巴比妥钠,以原配方作
