f因及数量表达与黏附活性的测定及意义

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1、万方数据1500中国卫生检验杂志2005年12月第15卷第12期ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology，Dec2005；Vol15No12【卫生与临床】原发性肾病综合征患者红细胞CRl密度相关基因及数量表达与黏附活性的测定及意义何庭宇1，郭聂涛2，杨进2，李燕林2，邓波2(1．广东省中山市人民医院，广东中山528403；2．广东省中山市中医院，广东中山528400)[摘要]目的：探讨原发性肾病综合征(PNS)与红细胞CRl密度相关基因及数量表达与粘附活性的相关性。方法：测定56例PNS患者红细胞CRl密度相

2、关基因及数量表达与粘附活性，并与健康人比较。结果：56例PNS患者红细胞CRl密度相关基因(HH：60．7％，HL：30．3％，LL：9．0％)、与30名健康人(HH：66．7％，HL：25．9％，LL：7．4％)比较无显著性差异；PNS患者红细胞CRl数量表达与黏附活性明显低于健康人(P<0．01，P<0．05)。并且PNS患者红细胞CRl高、中、低表达基因型的数量表达与黏附活性均低于健康人高、中、低表达基因型(P

3、与其数量表达和黏附活性有着非常密切的关系。[关键词]原发性肾病综合征(PNS)；红细胞；密度相关基因；数量表达；黏附活性[中图分类号]R692[文献标识码]B[文章编号]1004—8685(2005)12—1500—02原发性肾病综合征(PNS)是一种由不同肾脏疾病引起的具有共同临床表现，病理生理和代谢变化的综合征。其发病除与机体细胞免疫代谢紊乱外，亦与免疫复合物激活补体产生膜攻击物，造成细胞溶解，促进细胞因子释放，从而介导肾脏损伤有关。红细胞作为血循环中含量最多的血细胞，其表面广泛表达的补体受体I型分子(CRl)在调控补体系统以及清除抗原物质过程中有

4、重要作用。我们对56例原发性肾病综合征(PNS)患者的红细胞CRl密度相关基因及数量表达与粘附活性进行了测定，现将结果报道如下。1资料与方法1．1临床资料所有56例均为我院肾内科2002年1月～2004年5月收治的病人，男29例，女27例，年龄30一65岁，平均49士1．23岁；病程2～10年，平均34-1．47年，均符合文献⋯制定的诊断标准。健康人30例，男17例，女13例，年龄28～60岁，平均464-1．78岁，无心、脑、肝、肺疾病。1．2检测方法1．2．1确诊病人及体检者于清晨空腹抽取肘静脉血1ml，枸橼酸钠(EDTA)1：9抗凝。1．2．2红

5、细胞CRl分子基因密度PCR+RFLP检测根据CRl密度相关基因组只在红细胞膜上表达的原理，CRl基因内含子7．4kb和6．9kb，HindIII酶切片段分别与红细胞CRl高密度(H)、低密度(L)表达有关，PCR扩增时间参数为：94℃变性300s，55℃复性50s，72℃延伸50s，进行30个循环后72。C延伸5min。经过PCR扩增和HindIR酶切，然后琼脂糖及溴化乙锭电泳染色后电泳区分出红细胞CRl[基金项目]广东省中山市科技局科研项目(2003C121)[作者简介]，何庭宇(1956一)，女，大学本科，主任技师，主要从事免疫检验工作。密度相关

6、的3种基因型，高表达型即HH型无突变位点，酶切后仅有一条1．8kb带；中表达型即HL型，酶切后得到3条带即1．8、1．3、0．5kb；低表达型即LL型，酶切后为2条带即1．3、0．5kb带。1．2．3红细胞膜补体受体1型免疫分子定量测定取沉淀红细胞10山生理盐水洗涤2次后用PBS配成2％红细胞悬液，在V型滴定板每孔加入CRl一抗体10一，定量红细胞悬液20止混匀后37℃，45rain，1％BSA洗涤2次后加碱性磷酸酶标记二抗10止，37℃，30min，洗涤后叩干加显色液120山37℃，30min，水平离心取上清显色液100山，405nm读取其A值，标本

7、的A值与对照孔A值之差即为测定值。1．2．4红细胞天然免疫粘附功能测定EDTA抗凝血1ml水平离心2000r／rain，5min取沉淀红细胞5山加入400出生理盐水中配成1．25％红细胞悬液，取红细胞悬液50止，定量致敏靶细胞株悬液100一，自身血浆10003混匀，37。C，孵育40min，瑞氏染色，计数100个靶细胞并计算粘附率。以上方法及试剂由中国免疫学会红细胞免疫学会提供B“1。1．3统计学方法计数资料采用r检验，计量资料采用均值4-标准差(瑟4-s)表示，t检验。2结果2．1PNS患者红细胞CRl密度相关基因及数量表达与黏附活性的变化PNS患者

8、红细胞CRl密度相关基因高表达比率略低于健康人，低表达略高于健康人，但无显著性差异(P>0．0