生物化学设计性实验报告

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1、中央民族大学生命与环境科学学院生物化学综合性设计实验报告一种简便快捷提取小白鼠肝脏DNA的方法OneasimpleandconvenientMethodsofGenomeDNAExtractionofmouse姓名：吕梦春学号：1143021年级：2011级专业：生物科学类小组成员：张星瑶指导教师：王斌2012年12月一种简便快捷提取小白鼠肝脏DNA的方法吕梦春中央民族大学生命与环境科学学院北京100081）摘要:主要运用了盐洗法提取小白鼠肝脏的基因组DNA利用分光光度计测定其OD260与OD280的吸光值计算比率估计核酸的纯度并利用琼脂糖凝胶电泳观察DNA片段在凝胶中的位置鉴定DNA.实

2、验结果显示，用盐析法提取的DNA纯度较高。是一种简单高效的提取动物肝脏的方法。关键词:小白鼠DNA提取琼脂糖凝胶电泳OneasimpleandconvenientMethodsofGenomeDNAExtractionofmouseMeng-chunLv（MINZUuniversityofchinaBEIJING100081）Abstract：ThegenomeDNAsofmousewereextractedwith.ThentherationofOD260andOD280wasdeterminedbyultravioletspectrophotometer.Thepurityofthen

3、ucleicacidwascalculatedandthepositionofDNAsegmentsinthegelwasobservedbyagarsugargelelectrophoresisFinallythemethodswasshowedasimpleconvenientswiftandeconomicmethodtogenomeDNAextraction.Keywords:mousegenomeDNAsagarsugargelelectrophoresis1.前言20世纪50年代初DNA被证明是所有生物最主要的遗传物质.随着生物化学、分子生物学和遗传学的发展以及基因工程等生物技

4、术的创立有关DNA的实验技术也得到了飞速发展.无论是基因工程还是蛋白质工程首先都需要从生物体中提取基因组DNAgenomicDNA所以DNA的分离提取在分子生物学以及相关学科的研究中是一个非常重要的步骤分离得到DNA样品质量的好坏直接关系到下一步实验的成败.而基因组DNA提取和纯化方法的灵敏度、特异性直接影响DNA的质量.因此许多学者一直在努力探索各种基因组DNA的提取方法.目前国内外已有多种提取DNA的方法如水煮法、酚抽提法、甲酰胺解聚法、盐酸胍裂解法、盐析法等.在众多方法中虽然有人对其进行过比较但究竟哪一种方法更适用于普遍意义上的DNA提取还未见报道.本实验采用常用的盐洗法对小白鼠肝脏

5、基因组DNA进行提取是一种简便、快捷、实用的基因组DNA提取方法.1.1实验目的学习从生物中分离DNA（盐析法）的原理和方法；掌握测定核酸DNA的原理和方法；掌握核酸DNA的琼脂糖电?镜脑砗头椒ǎ?.2实验原理1.2.1关于基因组DNA不同生物（植物、动物、微生物）的基因组DNA的提取方法有所不同不同种类或同一种类的不同组织因其细胞结构及所含的成分不同，分离方法也有差异。在提取某种特殊组织的DNA时必须参照文献和经验建立相应的提取方法以获得可用的DNA大分子。尤其是组织中的多糖和酶类物质对随后的酶切、PCR反应等有较强的抑制作用，因此用富含这类物质的材料提取基因组DNA时应考虑除去多糖和

6、酚类物质。本次试验中，主要利用不同浓度的NaCl溶液将DNP和RNP从样品中抽提出来.将抽提得到的核蛋白用SDS处理DNA即与蛋白质分开.可用氯仿-异戊醇将蛋白质沉淀除去而DNA则溶解在溶液中.向溶液中加入适量的乙醇DNA即析出.为了防止DNA酶解提取时加入EDTA乙二胺四乙酸抑制DNase.加入了RNA酶，分解RNA。1.2.2关于DNA纯度测定紫外吸收是是实验室中最常用的测定DNA或RNA的方法，核酸样品的纯度可用紫外分光光度法进行测定、读出260nm与280nm的吸光度（A）即光密度（OD）值，从A260/A280的纯比值即可判断样品的纯度。DNA的A260/A280应大于1.8，纯

7、的RNA应达到2.0.样品中如含有杂蛋白及苯酚，A260/A280比值即明显降低。不纯的样品不能用紫外吸收法做定量测定。对于纯的样品，只要读出260nm的A值即可算出其含量。，通常以A值为1相当于50μg/ml双螺旋DNA或40μg/ml单链DNA（或RNA）或20μg/ml寡核苷酸计算。这个方法既快速又相当准确，而且不会浪费样品。对于不纯的核酸可以用琼脂糖凝胶电泳分理处区带后，经溴化乙锭染色在紫外灯下粗略地估计其含量。