高效液相色谱法原理与应用

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1、高效液相色谱法原理与应用参考书《高效液相色谱及其应用》于世林《液相色谱检测方法》张晓彤《实用高效液相色谱法的建立》L.R.施奈德1第1章色谱基本原理一、色谱法概述色谱法的定义与特点色谱法的分离原理色谱法的特点色谱法的分类21.色谱法的定义茨维特的实验3色谱分离效果图4因此色谱法是一种分离方法。它的特点是：有两相，一是固定相，一是流动相，两相作相向运动。Chromatography将色谱法用于分析中，则称为色谱分析。色谱分析是一种分离、分析法。52、色谱法分离原理当流动相中所携带的混合物流过固定相时，就会和固定相发生作用(

2、力的作用)。由于混合物中各组分在性质和结构上有差异，与固定相发生作用的大小也有差异。因此在同一推动力作用下，不同组分在固定相中的滞留时间有长有短，从而按先后不同的次序从固定相中流出。6高效液相色谱仪的分析原理高效液相色谱仪的结构色谱柱在高效液相色谱仪中的作用和峰形产生原理高压泵进样器检测器色谱工作站色谱柱73、色谱法的分类按流动相状态的不同，可分为气相色谱法(GC)液相色谱法(LC)超临界流体色谱(SFC)8什么是气相色谱法？以气体为流动相的色谱法GasChromatogaphy，简称GC适合分离分析易汽化（在-190℃

3、-500℃范围内有0.2-10mmHg的蒸气压的）稳定、不易分解、不易反应的样品，特别适合用于同系物、同分异构体的分离。9应用举例（GC）10什么是液相色谱法？以液体为流动相的色谱法LiquidChromatogaphy，简称LC适合分离分析高沸点、热不稳定、离子型的样品。11按固定相使用的形式可液相色谱法又可分为：柱色谱（ColumnChromatography）将固定相装在色谱柱内纸色谱（PaperChromatography）用滤纸做固定相或固定相载体的色谱薄层色谱（ThinLayChromatography）固定

4、相均匀涂在玻璃板或塑料板上12TLC的应用123456789BandsDescription1PseudoginsenosideF112AmericanGinseng3GinsenosideRg14GinsenosideRf5Ginseng6GinsenosideRc7GinsenosideRb18Notoginseng9NotoginsenosideR1人参、西洋参和三七药材的鉴别13丹参药材有效成分的HPLC图谱1.Danshensu;2.Protocatechuicacid;3.Protocatechualdehy

5、de;4.Caffeicacid;5.SalvianolicacidF;6.SalvianolicacidD;7.SalvianolicacidJ/isomer;8.SalvianolicacidE;9.Rosmarinicacid;10.Lithospermicacid;11.SalvianolicacidB;12.SalvianolicacidB/E/isomer;13.SalvianolicacidA;14.DihydrotanshinoneI;15.Tetrahydrotanshinone/isomer;16.C

6、ryptotanshinone;17.TanshinoneI;18.TanshinoneIIA1234568710911121615141317181415拖尾峰伸舌峰鬼峰、假峰畸峰峰底基线漂移基线噪声谱带扩张16死时间(tM):完全不保留组分流出系统的时间保留时间(tR):调整保留时间(t’R):死体积(VM):保留体积(VR):调整保留体积(V’R):17R:分离度tR:保留时间t0：死时间W：峰底宽度2.色谱分离基本方程18不同R值的峰重叠情况示意图R>1.5可以得到基线分离分离度R反映的是相邻两个峰的分开程度R太

7、小，两个峰无法彻底分离R太大，分离时间过长，工作效率低下一般要求R>1.5，也可遵循行业特殊规定19根据该公式优化试验条件，提高分离度R。从数学推导来看，分别增大n，α，k值，都可以提高分离度。色谱分离基本方程20分离选择性（α）对分离度（R）的影响如果t0=1minα=1.64/1.58=1.04α=1.15/0.85=1.35α=0.95/0.63=1.50改变分离选择性α的方法改用不同的流动相改变流动相的组成α并非必须大于1.5！改变流动相pH值尽量优化前几种实验条件提高a值，改变柱温避免改变固定相（买新柱子），以

8、便降低成本应用特殊的化学效应改变固定相21柱效（n）对分离度（R）的影响以上两张谱图k，,α值完全相同，仅仅由于柱效高低不同使得它们具有不同的分离度。直观的看，峰的尖锐程度代表了柱效高低，峰越尖锐，其柱效越高，通常使用理论塔板数（n）的大小衡量柱效的高低22理论塔板数和理论塔板高度的计算方法理论塔板数理论塔板高度HE