高效液相色谱法工作原理

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1、第十六章高效液相色谱法一一、一、、高效液相色谱法的特点、高效液相色谱法的特点二二、二、、流程及主要部件、流程及主要部件三三、三、、影响分离的因素、影响分离的因素四四、四、、高效液相色谱法的主要分离类型、高效液相色谱法的主要分离类型概述高效液相色谱法（（HPLC（HPLCHPLC）HPLC））是）是是20是202020世纪世纪606060年代末707070年代初发展起来的一种新型分离70年代初发展起来的一种新型分离分析技术，，随着不断改进与发展，随着不断改进与发展，，目前已，目前已成为应用极为广泛的化学分离分析的重要手段。一一、一、、液相色谱分离原理及分类、液相色

2、谱分离原理及分类和气相色谱一样，，液相色谱分离系统也，液相色谱分离系统也由两相——固定相和流动相组成。液相色谱的固定相可以是吸附剂、、化学键合、化学键合固定相（（或在惰性载体表面涂上一层液（或在惰性载体表面涂上一层液膜膜）、膜）、离子交换树脂或多孔性凝胶；；流；流动相是各种溶剂。被分离混合物由流动相液体推动进入色谱柱。。根据。根据各组分在固定相及流动相中的吸附能力、、分配系数、分配系数、、离子交换、离子交换作用或分子尺寸大小的差异进行分离。色谱分离的实质是样品分子（（以下称（以下称溶质））与溶）与溶剂剂（剂（（即流动相或洗脱液（即流动相或洗脱液））以）以及固定相

3、分子间的作用，，作用力的大，作用力的大小小，小，，决定色谱过程的保留行为，决定色谱过程的保留行为。根据分离机制不同，，液相色谱可分，液相色谱可分为为：为：液固吸附色谱、、液液分配色谱、液液分配色谱、、化、化合键合色谱、、离子交换色谱以及分子排、离子交换色谱以及分子排阻色谱等类型。它是在经典液相色谱基础上，，引入了气，引入了气相色谱的理论，在技术上采用了高压泵泵、泵、、高效固定相和高灵敏度检测器、高效固定相和高灵敏度检测器，，因，因而具备速度快、、效率高、效率高、、灵敏度高、灵敏度高、、操、操作自动化的特点。。为了更好地了解高效。为了更好地了解高效液相色谱法优越性

4、，，现从两方面进行比，现从两方面进行比较较：较：高效液相色谱法与经典液相色谱法高效液相色谱法比起经典液相色谱法的最大优点在于高速、、高效、高效、、高灵敏、高灵敏度度、度、、高自动化、高自动化。。高速是指在分析速度上。高速是指在分析速度上比经典液相色谱法快数百倍。。由于经典。由于经典色谱是重力加料，，流出速度极慢，流出速度极慢；；而高；而高效液相色谱配备了高压输液设备，，流速，流速最高可达103cm·min-1。例如分离苯的羟基化合物，7个组分只需1min就可完成。对氨基酸分离，，用经典色谱法，用经典色谱法，，柱长约，柱长约170cm，，柱径，柱径0.9cm，，流

5、动相速度为，流动相速度为30cm3·h-1，需用20多小时才能分离出20种氨基酸；；而用高效液相色谱法；而用高效液相色谱法，只需lh之内即可完成。又如用25cm×0.46cm的Lichrosorb－ODS(5μ)的柱，，采用梯度洗脱，采用梯度洗脱，，可在，可在不到0.5h内分离出尿中104个组分。高效液相色谱法与气相色谱法（（l（lll）））气相色谱法）气相色谱法分析对象只限于分析气体和沸点较低的化合物，，它们仅占，它们仅占有机物总数的202020％。20％。对于占有机物总数近近80近808080％％％的那些高沸点％的那些高沸点、热稳定性差、摩尔质量大的物质，，

6、目前主要采用高效液，目前主要采用高效液相色谱法进行分离和分析。（2））液相色谱能完成）液相色谱能完成难度较高的分离工作，，因为，因为：①气相色谱的流动相载气是色谱惰性的，不参与分配平衡过程，，与样品分子，与样品分子无亲和作用，，样品分子只与固定相相，样品分子只与固定相相互作用。而在液相色谱中，，流动相液体也与固定相，流动相液体也与固定相争夺样品分子，，为，为提高选择性增加了一个因素。。也可。也可选用不同比例的两种或两种以上的液体作流动相，增大分离的选择性。②液相色谱固定相类型多，，如离子交换色，如离子交换色谱和排阻色谱。。等。等等，等，，作为分析时，作为分析时选

7、择余地大；；而气相色谱；而气相色谱并不可能的。③液相色谱通常在室温下操作，，较低的，较低的温度，，一，一般有利于色谱分离条件的选择。（3））由于液体的）由于液体的扩散性比气体的小105倍倍，倍，，因，因此，，溶质在液相中的，溶质在液相中的传质速率慢慢，慢，，柱，柱外效应就显得特别重要；；而在气；而在气相色谱中，，柱，柱外区域扩张可以忽略不计。（4））液相色谱中制备样品）液相色谱中制备样品简单，回收样品也比较容易，而且回收是定量的，适合于大量制备。但液相色谱尚缺乏通用的检测器，仪器比较复杂，价格昂贵。。在实。在实际应用中，这两种色谱技术是互相补充的。目前高效液相色

8、谱法已被广泛应用于分析对