实验八 花粉活力及花粉管伸长的测定

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1、时间就是金钱，效率就是生命！实验八花粉活力及花粉管伸长的测定[实验目的]通过花粉活力的测定，可以了解花粉的可育性，并掌握不育花粉的形态、生理特征。熟悉测定花粉活力的几种方法。Ⅰ碘-碘化钾（I-KI）染色测定法[实验原理]禾谷类植物花粉成熟时积累淀粉较多，通常可用I-KI染成蓝色。发育不良的花粉常呈畸形，不积累淀粉，用I-KI染色，不呈蓝色，而呈黄褐色。[器材与试剂]1.实验仪器显微镜，镊子，恒温箱，载玻片，盖玻片2.实验试剂I-KI溶液（取KI2g溶于5～10mL蒸馏水中，然后加入1gI2待全部溶解后，再加蒸馏水至200mL。（贮于棕色瓶中备用）凡被染

2、成蓝色的为发育好、活力强的花粉粒，呈黄褐色的为发育不良的花粉粒。Ⅱ过氧化物酶测定法[实验原理]具有生活力的花粉含有活跃的过氧化物酶。此酶能利用过氧化氢使各种多酚及芳香族胺发生氧化而产生颜色，依据颜色可知花粉的活性强弱。[器材与试剂]1．实验仪器显微镜，载玻片，盖玻片，镊子2．实验试剂0.5%联苯胺[将0.5g联苯胺溶于100mL50%乙醇中（有毒，注意安全）]，0.5%ɑ-萘酚（将0.5gɑ-萘酚溶于100mL50%乙醇中），0.25%碳酸钠（将唯有惜时才能成功，唯有努力方可成就！时间就是金钱，效率就是生命！0.25g碳酸钠溶于100mL蒸馏水中），实

3、验前将上述三种溶液各取10mL混合均匀成试剂Ⅰ，0.3%过氧化氢。3、实验材料花粉［实验步骤］1．干洁载玻片上放少量花粉，然后加试剂Ⅰ和0.3%过氧化氢各1滴，搅匀后盖上玻片。30℃下经10min后在低倍显微镜下观察。如花粉粒为红色，则表示有过氧化物酶存在，花粉有活力，能发芽；如无色或黄色，则表示已失去活力，不能发芽。2.观察2～3个制片，每片取5个视野，统计100粒，并计算其发芽率。Ⅲ氯化三苯基四氮唑法（TTC）实验原理见实验7种子活力的快速测定中的TTC法。[器材与试剂]1.实验仪器显微镜，镊子，载玻片，盖玻片，2.实验试剂0.5%TTC溶液（参阅

4、实验7-1）[实验步骤]1.取少数花粉于载玻片上，加1～2滴TTC溶液，盖上盖玻片。2.将制片于35℃恒温箱中放置15min。然后置于低倍显微镜下观察。凡被染为红色的活力强，淡红的次之，无色者为没有活力的花粉或不育花粉。3.观察2～3个制片，每片取5个视野，统计100粒，然后计算花粉的活力百分率。[注意事项]注意需将花粉完全浸于药液中。[实验作业]1.用3种方法统计不同植物花粉的发芽率。2.试比较3种方法，同一花粉的发芽率是否相同，分析其原因。唯有惜时才能成功，唯有努力方可成就！时间就是金钱，效率就是生命！IV花粉管生长的测定[实验目的]熟悉测定花粉管

5、生长的方法及影响生长的主要因素。[实验原理]成熟花粉具有较强的生活力，在适宜的培养条件下便能萌发和生长。花粉的萌发和生长情况与植物种类、花粉成熟度、气候和培养条件等有关。实验中通过改变培养条件，利用正交实验法测定花粉管长度，可以找出促进花粉生长的最佳培养条件。[器材与试剂1.实验仪器恒温箱，显微镜，目镜测微尺，物镜测微尺，花粉培养小室，镊子，载玻片，盖玻片。2.实验试剂培养基（内含琼脂0.5%，硼酸、蔗糖浓度按表7-2进行配制）[附]培养基的配制在配制培养基时，琼脂浓度不变，硼酸、蔗糖的浓度改变，pH和培养温度也改变，用以观察何种组合更适于花粉萌发和生

6、长。若培养基不是当天使用，则需要高压灭菌。（1）确定硼酸、蔗糖、温度、pH4种因子的水平值。实验中对每种因子选择低、中、高3种水平（以1，2，3表示，见表7-2）。（2）按表7-2配制培养基。3、实验材料刚开放或将要开放的成熟花朵表1:因子水平表因子水平A蔗糖含量/%B硼酸浓度/（μg/mL）C温度/℃DpH1510236。021025286。531550337。0唯有惜时才能成功，唯有努力方可成就！时间就是金钱，效率就是生命！表2:培养基配制方案实验组号A蔗糖含量/%B硼酸浓度/（μg/mLC温度/℃DpH15（1）10（1）23（1）6.0（1）2

7、5（1）25（2）28（2）6.0（2）35（1）50（3）33（3）7.0（3）410（2）10（1）28（2）7.0（3）510（2）25（1）33（3）6.0（1）610（2）50（3）23（1）6.5（2）715（3）10（1）33（3）6.5（2）815（3）25（2）23（1）7.0（3）915（3）50（3）28（2）6.0（1）注：括号内数字表示因子水平[实验步骤]1.采取刚开放或将要开放的成熟花朵（取自丝瓜、南瓜、烟草、凤仙花、金莲、白花三叶草及葫芦科的其他植物。酷热天气中午前后不能采，最好现采现用）。2.制备培养小室在干洁的载玻片上

8、放一只直径15mm，高5mm的玻璃环，环口需用金刚砂磨平，外面涂少许凡士林（或石蜡）使之固定和