马铃薯的组织培养

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1、青岛农业大学课程论文马铃薯的组织培养姓名：秦聪学号：20122832专业：电气工程及其自动化中国•青岛摘要：马铃薯是我国的重要粮食产物之一，但有于病毒污染，基因退化等，导致马铃薯产量降低，但随着组织培养技术的逐渐成熟，已经可以实现大规模生产脱毒的幼苗。掌握马铃薯的组织培养的基本原理了解影响培养结果的因素，有利于完善培养技术，解决马铃薯组织培养过程中的常见问题。关键词：马铃薯组织培养培养过程注意事项前言马铃薯组织培养（PlantTissueCulture）：是指通过无菌操作分离马铃薯体的一部分（外植体explant），接种到培养基上，在人工控制的条

2、件下（包括营养、激素、温度、光照、湿度）进行培养，使其产生完整植株的过程。（主要有原生质体（Protoplast），悬浮细胞，组织（愈伤组织Callus、茎尖分生组织），器官（胚，花药，子房，根和茎）的培养。其中最常见的是愈伤组织培养。）组培意义：1、基础理论研究（试验体系的准确性和可重复性，广泛用于细胞、组织的代谢生理及其它生化等方面的研究（如分化问题））。2、应用研究（无性繁殖系快速繁殖的生产、试管苗的商品化，遗传育种，种质保存，克服远缘杂交，种质资源创新，获得转基因植株）。组培应用前景：1、作物育种上的应用（1、花药和花粉培养2、胚胎培养3

3、、细胞融合4、基因工程5、培养细胞突变体6、种质保存）2、作物脱毒和快繁上的应用（马铃薯，兰花）3、在马铃薯有用产物生产上的应用4、在遗传、生理、生化和病理研究上的应用。正文1基本流程1、表面灭菌由于在培养基上，真菌和细菌的生长远远快于马铃薯试材，导致过盛生长而杀死植株。因此。接种前应对材料进行彻底的表面消毒，淘汰内部已受到真菌和细菌侵染的材料。针对马铃薯的取用部位，确定灭菌剂种类、浓度及处理时间，以达到彻底消除病菌又不杀死马铃薯材料的目的。2、愈伤组织诱导、脱毒及芽分化诱导愈伤组织的培养基以MS为基本培养基，加入适宜浓度的激素。3、芽的继代更换

4、培养基的配方，调整激素和其他营养的浓度，将诱导的丛生芽分离，将其中生长态势良好的马铃薯小苗转接至生根培养基，其余的单芽再行继代培养。4、生根培养将单株马铃薯小苗转接生根培养基进行培养。5、炼苗及移栽将生长旺盛、根系发达的试管苗移入常温室内打开瓶盖放置一段时间，然后移入栽培基质中温室培养。2具体步骤1、表面灭菌消毒方法：冲洗马铃薯材料除去泥土等大的颗粒→浸入70-75％乙醇，有利于马铃薯表面的浸湿→用5-20％NaClO溶液（加1滴表面活性剂）表面消毒5-10min→用无菌水冲洗至少3遍→与消毒剂接触过的切面在转移到无菌培养基前应切去，因为消毒剂会

5、杀死外露的细胞从而影响营养吸收→切取外植体，通常为10mm的茎段和直径10mm的叶片部分（太大激素作用减弱，太小则不易成活）。消毒注意事项：1、表面消毒剂对马铃薯组织是有害的，应正确选择消毒剂的浓度和处理时间，以减少组织的死亡。2、在表面消毒后，必须用无菌水漂洗材料3次以上以除去残留杀菌剂，但若用酒精消毒，则不必漂洗。3、与消毒剂接触过的切面在转移到无菌基质前需将其切除，因为消毒剂会阻碍马铃薯细胞对基质中营养物质的吸收。4、若外植体污染严重则应先用流水漂洗1小时以上或先种子培养得到无菌种苗，然后用其各个部分建立组织培养。5、HgCl2效果最好，但

6、对人的危害最大，用后要用水冲洗至少5次。2培养基培养基是植物组织生长的物质基础，因此其组成和理化性质都非常重要。马铃薯组织培养通常使用MS基本培养基，并根据植物的生长状态加入适当的激素和其他营养物质。离体条件下，植物激素对马铃薯茎段愈伤组织的诱导、分化起着重要作用。在有植物生长调节剂的培养基上愈伤组织诱导率可达100%，在不含激素的培养基上基本不形成愈伤组织。高浓度的生长素和细胞分裂素配比有利于愈伤组织的诱导，而低浓度配比则有利于愈伤组织的分化。马铃薯离体组织培养常用的激素有：生长素如2,4-D、IAA、NAA，细胞分裂素如KT、6-BA，还有赤

7、霉素。实验中应该根据研究目的选择合适的激素配比，各种激素均有其最适浓度，过高或过低都会影响植株成愈和分化。培养基的pH值也有重要影响，pH值影响培养基凝固程度和材料吸收营养。培养基渗透压50.7~202.7kPa适合于植物组织生长，太高会抑制其生长和分化。3愈伤组织培养脱毒：通过植物器官和组织的培养，分化诱导产生愈伤组织，愈伤组织再分化产生芽，长成小植株，可以得到无病毒苗。原因是受感染植株的组织脱分化形成愈伤组织中，细胞不携带病毒或细胞不含病毒。其原因是：病毒的复制速度比细胞的增殖速度慢；有些细胞通过突变体获得了抗病毒的特性，抗病毒侵染的细胞甚至

8、可能与敏感型细胞一起存在于母体组织中。试验表明，愈伤组织培养脱除病毒的效果比茎尖培养成功率高，但愈伤组织培养所产生的植株遗传性状不稳定，