HPLC原理培训教材

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1、液相色谱基础知识WatersLCSchool培训教材常见的分离方式❀蒸馏❀离心❀电泳❀过滤❀超滤✎色谱色谱法的分类色谱液相色谱气相色谱柱色谱纸色谱薄层色谱高效液相色谱HPLCHPLC分离的机理分离是一个物理的过程典型的仪器配置色谱泵及控制器数据处理及控制色谱柱检测器Waters486进样器液相色谱的应用一❀分析型液相色谱❀定性及定量分析✎灵敏度的要求✎样品的复杂性✎样品量的要求✎精度及准确度的要求✎容易使用液相色谱的应用二❀制备型液相色谱❀分离及纯化✎化合物的稳定性✎样品的复杂性✎制备量的要求✎纯度的要求及纯度

2、的鉴定✎方法的安全性开发液相色谱方法问题什么样的分离结果是好的?分辨率?什么是色谱的分辨率分辨率的公式V-V21R=1(W+W)212影响分辨率的因素K’K’aN❀分辨率的方程æköæa-1öæNöR=ç÷ç÷ç÷èk+1øèaøçè4÷ø✎k'是容量因子表达了样品与柱填料的作用强弱✎a是选择性系数描述两化合物分离的好坏程度是化学因素✎N是理论塔板数描述色谱峰的谱带展宽程度色谱柱的柱效NN理论塔板数计算公式2æV1öN=sç÷èWøWs方法W16切线法tanW5.54半峰高hW93s3sW164s4sW255s

3、5s用切线法计算柱效18.7022N=16éùé16.63ù4sêë0.80úûN=16êúVR=16.634së0.68û=8742plates=9569platesV=18.70R不好的色谱柱的柱效反而比好色谱柱的要高因为其拖尾部分测不出来njectIInjectW=0.80W=0.68用5s法计算柱效22é16.63ùé18.70ùN=25N5=25ê1.03ú5sê1.44úëûV=16.63ëûR=8240plates=3334platesV=18.70R4.4%4.4%heightheightInj

4、ectInjectW=1.03W=1.44GoodColumnBadColumn提高柱效的方法❀色谱柱本身✎减小填料的颗粒度✎找到最佳的流速(根据不同内径)✎合适的温度✎降低溶剂的粘度✎增加柱长其他影响柱效的因素❀柱外效应✎连接管路✎进样器检测器❀进样体积❀进样量容量因子k'k'与峰高的关系与R的关系❀改变k'值的方法✎调节流动相的极性pH离子强度等✎梯度淋洗选择性系数a❀定义tR2-t0k2a==t-tkR101✎Rµa-1a=1时两组分分不开a❀改变a的途径✎改变固定相✎改变流动相✎改变温度✎改变样品的本身

5、性质ak'N如何控制分辨率?液相色谱的检测模式灵敏度选择性及适应能力示差折光电导紫外荧光电化学响应通用选择性选择性选择性选择性灵敏度毫克纳克纳克PicogramPicogram线性范围1041061051010~1306流速敏感是是否否是温度敏感是是否否是梯度淋洗不可有限制可以可以脉冲的可以色谱条件的优化分离度速度容量分析型制备型分离度容量速度速度开发液相色谱方法❀分辨率是色谱分离中主要考虑的因素❀在开发色谱方法时有很多因素是很重要的除分辨率之外以下几个因素都要考虑✎灵敏度✎成本✎载样量✎容易使用✎分析速度✎色

6、谱柱寿命✎溶剂损耗✎效率