《HPLC原理与应用》PPT课件

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1、高效液相色谱法化学化工学院1.HPLC仪器结构及原理注射器进样器高压泵混合室溶剂预柱接头色谱柱检测器数据系统根据各组分在固定相及流动相中的吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸大小的差异，因此在同一推动力作用下，不同组分在固定相中的滞留时间有长有短，从而实现分离的目的1.HPLC仪器结构及原理3.操作条件的选择—流动相的选择流动相要求：(1)溶剂应当是高纯度，溶剂与固定相不互溶，并能保持色谱柱的稳定性；(2)溶剂的性能与使用的检测器应当匹配；选用检测器波长比溶剂的紫外截止波长要长，甲醇：205nm;乙腈：190

2、nm(3)溶剂对样品应有足够的溶解能力；(4)溶剂应具有低的粘度和适当低的沸点；(5)尽量避免使用具有显著毒性的溶剂。常用流动相溶剂：反向色谱常用流动相及冲洗强度H2O<甲醇<乙腈<丙醇<异丙醇<四氢呋喃最常用组成：甲醇/H2O、乙腈/H2O洗脱顺序：极性物质先洗脱下来正想色谱常用流动相及冲洗强度正乙烷<乙醚<乙酸乙酯<异丙醇洗脱方式—等度洗脱、梯度洗脱等度洗脱：整个洗脱过程中，流动相的组成比保持不变梯度洗脱：在一个分析周期中，按照一定的时间程序连续或阶段性的改变流动相的组成比，从而改变溶剂的极性、离子强度、pH值

3、等，使每个组分在适宜的条件下获得分离。梯度洗脱优点：改善峰型；提高柱效；减少分析时间；使强滞留组分不容易残留在柱子。梯度洗脱装置二元高压梯度：先加压后混合利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例输入梯度混合室，混合后进入色谱柱。一台高压泵，通过比例调节阀，将两种或者多种不同极性的溶剂按一定比例抽入高压泵中混合四元低压梯度：先混合后加压4.HPLC在各领域的主要应用1.环境:多环芳烃、多氯联苯、硝基化合物、酚类化合物、邻苯二甲酸脂等。2.食品:食品营养成分分析、食品添加剂分析、食品污染物分析。3.医药:合

4、成药物：抗生素、抗忧郁药物、黄胺类药等；天然药物：鉴别中药真伪或者产地、吲哚碱、鸦片碱、强心甙测定等。4.农药:有机农药、除草剂等。5.化工:无机化工产品、合成高分子化合物、表面活性剂、洗涤剂成分、化妆品、染料等。1.环境保护——多环芳烃标准品色谱图1.环境保护——苯及其衍生的分离谱图2.食品分析中的应用—食品营养成分分析啤酒中的有机酸分析2.食品分析中的应用—食品营养成分分析2.食品分析中的应用—食品添加剂分析三聚氰胺三聚氰酸猪肉中三聚氰胺和三聚氰酸的分析3.医药中的应用—抗生素的测定依诺沙星环丙沙星诺氟沙星3.

5、医药中的应用—复方丹参片中丹参酮ⅡA的测定丹参酮ⅡA3.医药中的应用—中药白鲜皮的指纹图谱不同地区的白鲜皮指纹图谱考察A吉林仁和B黑龙江C哈尔滨D上海E长沙F承德围场G西安H乌鲁木齐4.化工中的应用—24种禁用偶氮染料色谱图1231098765423242221201918171615141311124.HPLC发展前景固定相的发展前处理方法检测器的发展联用技术的发明与应用4.HPLC发展前景—固定相的发展固定相基质高纯硅胶微球聚合物微球有机-无机复合物氧化钴微球多孔石墨微球键合及改性技术立体保护键合固定相包埋极性

6、基团烷基键合固定相全氟烷基键合聚合物涂覆改性高纯硅胶基质固定相硅胶除了具有良好的机械强度、容易控制的孔结构和比表面积、较好的化学稳定性和热稳定性以及专一的表面化学反应等优点,还有一个突出的优点就是其表面含有丰富的硅羟基,这是硅胶可以进行表面化学键合或改性的基础。突出特点是耐溶剂冲洗，并且可以通过改变键合相有机官能团的类型来改变分离的选择性。化学键合的种类按键合官能团的极性分：极性和非极性键合。极性键合相：氰基(-CN)、氨基(-NH2)和二醇基(DIOL)键合相。非极性键合相：各种烷基(C1～C18)和苯基、苯甲基

7、等，以C18应用最广。硅胶键合固定相的应用10种混合物在大黄酸键合硅胶固定相(a)和C18(b)的色谱图聚合物基质固定相优点：色谱选择性好样品容量较大化学稳定性好不易产生非特异性吸附不足：刚性不理想、孔结构复杂、溶胀或收缩多孔石墨化碳固定相特点：稳定性好-在低或高pH条件下抑制酸碱离子极性样品具有较强的保留异构体选择性提高可分离旋光异构体可进行族分离流动相组成简单氧化钴基质固定相优点：稳定性好强碱分析速度快高温快速分析优点：高比例水流动相，不会导致烷基链收缩极性化合物(包括酸和碱性化合物)保留增强传统C18／C8固

8、定相选择性不同可用低浓度缓冲溶液作流动相，以及固定相官能团低流失，适合于LC/MS包埋极性基团烷基键合固定相包埋极性基团键合相作用机理溶质与极性基团的作用；溶质和硅羟基与极性基团的竞争作用；极性基团增加表面层水浓度氟烷基键合固定相特点：在与C18/C8相似的流动相条件下，选择性改善卤代化合物和芳香异构体的保留更强分离含羟基、羧基、硝基和其它极性基团化合物具有