HCG检测溯源问题

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1、人绒毛膜促性腺激素检测溯源问题刘奉亭青岛兰信医学检验所，青岛266100摘要　目的：探讨HCG检测的溯源性及实验间检验结果互相认可中存在的问题。方法：结合国际国内HCG检测现状，对有关HCG检测的影响因素及国际标准物质方面的问题进行综述。结果：HCG分子及其裂解产物种类繁多，抗原性相似又不完全相同，不同厂家试剂使用的抗体组合不同，对HCG类分子的识别不同。一些试剂的标签不正确或不清楚，一些实验人员对HCG检验的分子种类不清楚，国内HCG收费项目不全，是导致有意无意错报检验项目的原因。目前发布的HCG国际标准物质含有杂质，并且对于无活性的α亚

2、基和β亚基赋值错误。这些都给HCG检测结果的实验室间互相认可带来困难。结论：HCG检测的溯源及检验结果的实验室间互相认可尚存在许多问题。要解决这些问题，需要新的、以摩尔浓度赋值的HCG国际标准的发布，各试剂厂商以新的国际标准物质作为抗原来制备抗体，并用新的抗体制备的HCG检测试剂溯源到新的国际标准。另外，还要进一步普及有关HCG类分子及其裂解产物的知识宣传。血清人绒毛膜促性腺激素（HCG）的测定对于妊娠的确认和监测，异位妊娠及其治疗的监测，产前筛查，先兆流产、滋养层疾病、非滋养层肿瘤、生殖细胞瘤、膀胱癌、睾丸癌、肺癌等的诊断和治疗效果的监测

3、具有十分重要的意义[1-7]。人绒毛膜促性腺激素（HCG）与促黄体生成激素（LH）、促卵泡激素（FSH）及促甲状腺激素（TSH）都是由一个α亚基和一个β亚基所组成[8,9]。这些激素都拥有共同的α亚基，它们的区别在β亚基[10]。HCG的β亚基与FSH、TSH不同，但与LH的β亚基类似，LH的β亚基含有121个氨基酸，而HCG的β亚基含有145个氨基酸，在LH的β亚基的C末端延伸了24个氨基酸[11]。早期，人们采用生物学方法进行妊娠实验，将尿液注入幼鼠等动物，通过观察动物的反应而判断是否怀孕。1960年Wide和Gemzell建立了首个妊

4、娠实验的免疫学方法――红细胞凝集法[12]。由于当时使用的是抗HCG血清，测定HCG时会受到LH、FSH和TSH等激素的干扰。1972年Vaitukaitis等使用抗HCGβ亚基血清，建立了β-HCG的放射免疫测定法[13]。由于HCGβ亚基与其它激素β亚基的区别，该测定方法与生理浓度的LH、FSH和TSH没有显著的交叉反应，可更为准确地反映标本中的HCG含量。随着免疫检测方法学的不断改进，目前大多数医学检验机构基本都使用（电）化学发光法对HCG进行全自动的检测。HCG及其衍生物有很多种，来源与生理学功能各不相同。有常规HCG[14-16]

5、、高度糖基化的HCG[15-16]、硫酸化的HCG[17,18]、游离α亚基[19,20]、高度糖基化的游离α亚基[19,20]、游离β亚基[21]、高度糖基化的游离β亚基[22-26]。在激素的产生、分泌、代谢等过程中，HCG分子会发生断裂、解离等多种变化，从而在血、尿中以多种分子形式存在。目前已经发现有15种形式的HCG[27]（图1）。所有的HCG类检测试剂的定标品都使用可溯源至WHO的HCG标准。最早的WHO国际标准品（1938年和1964年）是HCG的粗制品。1978年这些国际标准品被高度纯化的HCG制品--第一批国际参考制品所取

6、代。这一标准品于1986作为第三批国际标准品、1999年作为第四批国际标准品发布。当今，所有的HCG类检测试剂的定标品都可溯源至第三批或第四批国际标准品。由于这些标准品是从商品的孕妇尿液的粗提取物纯化而来[28,29]。而这些尿液都是在没有温度控制的条件下收集和储存的，存在着HCG分子的解离和断裂,纯度也存在一定的问题。HCG测试方法使用的抗体也是针对这些尿液粗提取物纯化的HCG及其亚基的[30]抗体。为解决HCG国际标准品不纯等问题，2003-2005年WHO的IFCC工作组从人尿中纯化了完整HCG、缺刻HCG、HCGβ亚基、缺刻HCGβ

7、亚基、HCGα亚基、HCGβ核心部分等6种形式的HCG，制备了6种国际参考物质(InternationalReferenceReagents)[31]，分装、冻干并以mol/L定值[32]。这些新制备的国际参考物质比第三批、第四批HCG国际标准品的纯度有了很大的提高。2009年，Sturgeon[33]等调查了使用不同的测定方法对这6种参考物质的测定结果,发现不同HCG测定方法在识别不同形式的HCG时有非常大的差异.他们调查的16种测试方法中，4种仅识别HCG，6种识别HCG及游离β亚基，6种识别HCG、HCGβ和β核心部分。他们认为这些差

8、异是导致测定HCG时，不同方法间差异的主要原因。Cao和Rej[34]将完整的HCG和游离β-HCG单一或组合加入到的无HCG血清基质中，制备出了含完整HCG、含hCGβ和含完整