5.19藏药湿生扁蕾药材RP-HPLC指纹图谱的研究

《5.19藏药湿生扁蕾药材RP-HPLC指纹图谱的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、藏药湿生扁蕾药材RP-HPLC指纹图谱的研究郭亮中药学本科2006级指导老师景明摘要:目的:建立藏药湿生扁蕾药材反相高效液相色谱RP-HPLC指纹图谱分析方法，为有效控制湿生扁蕾药材的质量奠定基础。方法:采用RP-HPLC，色谱柱为ZORBAXSB-C18，甲醇-0.4%磷酸水溶液梯度洗脱，紫外检测波长为260nm，流速为1.0mL/min，记录时间为60min，分析了10批湿生扁蕾药材的HPLC指纹图谱。结果:在选定的色谱条件下通过相似度分析确定10个色谱峰构成湿生扁蕾药材指纹图谱的特征峰。结论:采用RP-HPLC所建立的指纹图谱具有稳定、重复性好的特点，可用于湿生扁蕾药材的质量控制

2、。关键词:湿生扁蕾；指纹图谱；反相高效液相色谱法湿生扁蕾为龙胆科植物Gentianopsispaludosa（Munro）Ma.的干燥全草，藏药名为机合斗。分布于甘肃西南部、青海东部、四川北部及西藏等地区。湿生扁蕾全草主要含有1,7二羟基-3,8-二甲氧基等口山酮类、木犀草素等黄酮类、齐墩果酸等三萜类化合物。此外，还含还原糖、氨基酸、酚类、有机酸等[1-3]。湿生扁蕾具有清热解毒、利湿消黄、健脾止泻等功能，用于肝炎、胆囊炎、热病发斑、目赤肿痛、消化不良、肠胃炎等[3]。现代药理学研究表明，湿生扁蕾具有抗氧化、抗菌、护肝等多种药理活性[4-5]。但目前为止一直缺乏综合评价和分析湿生扁蕾药

3、材品质的方法。中药材指纹图谱是近年来被国际公认的控制中药或天然药物质量的有效方法[6-8]，其优点在于可全面反映中药复杂的化学成分及其相对比例。本研究采用，建立了湿生扁蕾药材的指纹图谱，为的质量评价提供了依据。本文采用反相高效液相色谱法对湿生扁蕾药材指纹图谱进行了研究，为湿生扁蕾的药材鉴别、质量评价以及质量标准的制定提供依据。1仪器与试药AgilentHP1200高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)；AE-240电子天平（梅特勒-托利多仪器上海分公司）；KQ-100超声波清洗器（昆山市超声技术有限公司）；R-200旋转蒸发仪（瑞士布奇）。甲醇(色谱纯，天津市光复精细化工研究所)；磷酸（分析

4、纯，白银良友化学试剂有限公司）；重蒸馏水（自制）；其它试剂均为分析纯。木犀草素对照品（购自中国药品生物制品检定所，批号111520-200201）。湿生扁蕾药材采自甘肃、青海10个不同地区，均来源于龙胆科扁蕾属植物湿生扁蕾Gentianopsispaludosa（Munro）Ma.的干燥全草，由甘肃省药品检验所宋平顺主任药师对以上品种进行鉴定。(湿生扁蕾具体产地见表1)。表1　甘肃、青海不同地区湿生扁蕾药材编号12345产地合作玛曲临潭湟中湟源编号678910产地青海湖卓尼海晏碌曲夏河2方法与结果2.1　色谱条件　色谱柱ZORBAXSB-C18(250mm×4.6mm，5μm)；柱温3

5、0℃；流速1mL/min；进样量10μL；检测波长260nm；流动相甲醇（A）-0.4%磷酸水溶液（B）梯度洗脱（0～15min，A:B=35:65，15～60min，A:B=60:40)；记录时间为60min。2.2　供试品溶液的制备　精密称取不同产地湿生扁蕾药材的干燥粉末（60目）1.0g，置于50mL量瓶中，加入70%乙醇水溶液40mL，超声（33kHz，250W）提取30min，放冷，用70%乙醇定容至50mL，0.45mμ微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶液。2.3　方法学考察2.3.1　精密度试验　取同一批药材，按2.2项下方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件连续进样5次，

6、每次10μL，测定其HPLC图谱。选出10个共有指纹峰进行考察，以7号峰为参照峰，结果表明各共有峰相对保留时间的RSD均小于2%，相对峰面积的RSD均小于3%，表明仪器精密度良好。2.3.2　重复性试验　取同一批药材5份，按2.2项下方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件分别进样10μL，测得各共有峰的相对保留时间的RSD均小于2%，相对峰面积的RSD均小于4%，结果表明本试验方法的重复性良好。2.3.3　稳定性试验　取同一批药材，按2.2项下方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件分别在0，4，8，12，24h进样，每次10μL，得各共有峰的相对保留时间的RSD均小于2%，相对峰面

7、积的RSD均小于5%，表明样品溶液在24h内稳定。2.4指纹图谱及各项技术参数2.4.1样品指纹图谱及共有峰的标定　按上述液相色谱条件检测不同产地10批湿生扁蕾药材的指纹图谱，分别将10批湿生扁蕾药材的指纹图谱输入国家药典委员会开发的《中药指纹图谱相似度评价系统研究版(2004A)》中，进行时间窗的设定、谱峰匹配，最后确定湿生扁蕾色谱图中含有9个共有色谱峰，见图1、图2。图1　湿生扁蕾药材的HPLC色谱图图2　10批湿生扁蕾HPLC指纹图谱2.