大鼠血栓素B2(TXB2)酶联免疫检测试剂盒使用说明书 南建 96T 血清

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1、大鼠血栓素B2(TXB2)酶联免疫检测试剂盒使用说明书种属大鼠适用样本血清(浆)保存条件2-8℃仅用于科研，不得用于医学诊断使用前仔细阅读本说明书。本酶联免疫试剂盒是基于生物素双抗体夹心技术原理，来检测大鼠血栓素B2(TXB2)，仅用于科研，不得用于医学诊断。一、用途：用于大鼠血清、血浆及相关液体样本中血栓素B2(TXB2)的测定。二、工作原理本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中血栓素B2(TXB2)的水平。向预先包被了大鼠血栓素B2(TXB2)单克隆抗体的酶标

2、孔中加入血栓素B2(TXB2)，温育；温育后加入生物素标记的抗TXB2抗体，再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色深浅与样品中血栓素B2(TXB2)的浓度呈正相关。三、试剂盒组成编号产品名称48T96T1标准品（1280pg/ml）0.5ml0.5ml2标准品稀释液3ml3ml3酶标包被板12孔×4条12孔×8条4链霉亲和素-HRP3ml6ml5浓缩洗涤液20×20ml30×20ml6生物素

3、标记的抗-TXB2抗体1ml1ml7显色剂A液3ml6ml8显色剂B液3ml6ml9终止液3ml6ml10说明书1份1份11封板膜2张(48T)2张(96T)12密封袋1个1个四、需要而未提供的试剂和器材1、37℃恒温箱2、标准规格酶标仪3、精密移液器及一次性吸头4、蒸馏水5、一次性试管6、吸水纸五、注意事项1、从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2、各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。3、严格

4、按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。4、为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。5、不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质期之前使用。6、底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。六、洗板方法手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。七、标本要求1、不能检测含NaN

5、3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。2、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。八、操作程序1、标准品的稀释：（本试剂盒提供原倍标准品一支，用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释）：640pg/ml（5号标准品）120μl的原倍标准品加入120μl的标准品稀释液320pg/ml（4号标准品）120μl的5号标准品加入120μl的标准品稀释液160pg/ml（3号标准品）120μl的4号标准

6、品加入120μl的标准品稀释液80pg/ml（2号标准品）120μl的3号标准品加入120μl的标准品稀释液40pg/ml（1号标准品）120μl的2号标准品加入120μl的标准品稀释液2、根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。3、加样：①、空白孔：空白对照孔不加样品，生物素标记的抗TXB2抗体，链霉亲和素-HRP，只加显色剂A&B和终止液，其余各步操作相同；②、标准品孔：加入标准品50μl，链霉素-H

7、RP50μl(标准品中已事先整合好生物素抗体，故不加）；③、待测样品孔：加入样本40μl，然后各加入抗-TXB2抗体10μl、链酶亲和素-HRP50μl，盖上封板膜，轻轻振荡混匀，37℃温育60分钟。④、配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水稀释成1×应用液，备用。⑤、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。⑥、显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟。⑦、终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色

8、立转黄色）。⑧、测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后10分钟以内进行。⑨、根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。九、操作程序总结：准备试剂，样品和标准品加入准备好的样品和标准品，生物素标记二抗和酶标试剂，37℃反应60分钟洗板5次，加入显色液A、B，37℃显色10分钟加入终止液10分钟之内读OD值计算检测范围：5pg/ml→1000pg/ml规格：9