超氧化物歧化酶SOD的生产---林志豪

《超氧化物歧化酶SOD的生产---林志豪》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、超氧化物歧化酶（SOD）的生产生物技术林志豪目录一.SOD的概况二.SOD的运用三.SOD的生产四.SOD使用及生产时的注意事项五.注意事项一.SOD的概况1.超氧化物歧化酶是一种广泛存在于动物、植物、微生物中的金属酶，是生物体内抗氧化酶系中主要成员之一。SOD是机体内天然存在的超氧自由基清除因子，它通过上述反应可以把有害的超氧自由基转化为过氧化氢。尽管过氧化氢仍是对机体有害的活性氧，但体内6性极强的过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)会立即将其分解为完全无害的水。这样，三种酶便组成了一个完整的防氧链条。2.SOD

2、的分类按其结合的金属离子可分为Fe-SOD、Mn-SOD、CuZn-SOD三种3.SOD的理化性质3.1SOD对氰化物和H2O2的敏感性3.2SOD的吸收光谱特性3.3SOD稳定性及影响因素4.SOD的作用1、抗氧化2、预防慢性病及其并发症3、抗衰老4、抗疲劳5、化疗副作用的消除剂6、避免手术的二次伤害7、化解妇女的氧化压力危机二.SOD的运用1．药物类，主要集中在炎症病患者，尤其治疗类风湿关节炎、慢性多发性关节炎、心肌梗塞、心血管病、肿瘤患者以及放射性治疗炎症病患者；2．用于生化制药，作为一种生化酶制剂，广泛应用于临床

3、和科研上，具有极强的抗衰老，抗肿瘤、调节人体内分泌系统作用；3．用于化妆品类，可添加在化妆品中，具有抗氧化抗腐蚀的优良性能。以SOD为主要成份的产品风靡世界，引发了化妆品历史上的一场革命，使人类永葆青春美丽梦想成真；4.用作保健食品、饮料、如SOD糖、SOD口服液、SOD干啤等都非常畅销!在饮料、糖果、糕点等食品中加入SOD既可利用其抗腐蚀性延长保质期，又可调节人体内分泌系统。SOD被视为生命科技中最具神奇魔力的酶人体内的垃圾清道夫。SOD是氧自由基的自然天敌，是机体内氧自由基的头号杀手，是生命健康之本。全球118位科学

4、家发表联合声明：自由基是百病之源，SOD是健康之本。体内的SOD活性越高，寿命就越长。三.SOD的生产1.SOD酶的提取称取5克大蒜蒜瓣，加入石英砂研磨破碎细胞后，加入pH7.8,0.05mol/L的磷酸缓冲液（pH7.8）15ml，继续研磨20min,使SOD酶充分溶解到缓冲液中，然后6000r/min冰冻离心15min，放弃沉淀，取上清液。2.去除杂蛋白上清液中加入0.25倍体积的氯仿——乙醇混合液搅拌15min,6000r/min离心15min，放弃沉淀，得到的上清液即是粗酶液3.SOD酶的沉淀分离粗酶液在搅拌下缓

5、慢加入固体硫酸铵至饱和浓度60%，持续搅拌15min，6000r/min离心15min，得到SOD酶沉淀4.将沉淀溶入pH7.8，0.05mol/L的磷酸缓冲液5mL中，然后6000r/min离心15min，放弃沉淀，取上清液，用凝胶sephacylS-200进行纯化，然后超滤浓缩。5.用紫外分光光度计测定浓液的蛋白含量6.将浓缩冷冻干燥后即得成品。四、超氧化物歧化酶（SOD）的测定原理连苯三酚在碱性条件下，能迅速自氧化，释放出O2-,生成带色的中间产物。在自氧化过程的初始阶段，黄色中间产物的积累在滞后30-45s后就与

6、时间呈现性关系。中间产物在325nm处有强烈的光吸收，在有SOD存在时能催化生成O2和H2O2，从而阻止了中间产物的积累，通过计算就可以求出SOD的活力。仪器紫外分光光度计、pH计,离心机试剂⑴0.05mol/L连苯三酚溶液：称取3.15g连苯三酚用0.01mol/L盐酸溶液溶解并定容至500ml⑵pH=8.3Tris-HCl缓冲溶液①0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液:NH2C(CH2OH)3121.14取12.114g,溶解，定容至100ml②0.1mol/L盐酸:取8.6(9)ml浓盐酸，稀释至100

7、0ml③50毫升0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液19.9_毫升0.1mol/L盐酸混匀并稀释至100毫升。(保存温度:常温密封避光保存)测定步骤1、称取6g样品，加于现在冰箱中放置的缓冲液60ml(样品的10倍，视情况定)，在冰浴中研磨成匀浆，四层纱布过滤，滤液经4000r/min离心20min,取上清液用于酶活测定。2、连苯三酚自氧化速率的测定取4.5ml缓冲液，在25℃水浴中保温15min,加入10连苯三酚液，迅速摇匀空白：取4.5ml缓冲液，在25℃水浴中保温15min,加入10缓冲液，迅速摇匀倒入

8、光径1cm的比色杯中，在325nm波长下于恒温池中每隔30s测A值一次计算线形范围内，每1minA的增值，此即连苯三酚的自氧化速率，要求自氧化速率控制在0.07OD/min3.酶活测定测定方法与测连苯三酚自氧化速率相同，取1.5ml缓冲液，在25℃水浴中保温15min,加入3ml酶液，加入10连苯三酚液，迅速摇匀空白