WesternBlot试剂-自己总结

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1、WesternBlot试剂1、水（ddH2O）2、 丙烯酰胺和N，N’-亚甲双丙烯酰胺：应以温热(以利于溶解双丙稀酰胺)的去离子水配制含有29%(w/v)丙稀酰胺和1%(w/v)N，N’-亚甲双丙烯酰胺储存液丙稀酰胺29g，N，N-亚甲叉双丙稀酰胺1g，加H2O至100ml。)储于棕色瓶，4℃避光保存。严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。如有沉淀，可以过滤。（可以现买30%丙烯酰胺！）30％AcrylamideAcrylamide58gBis2g定容到20

2、0ml0.45μm过滤避光保存3、 分离胶缓冲液：1.5mmol/LTris-HCL(pH8.8):18.15gTris和48ml1mol/LHCL混合，加水稀释到100ml终体积。过滤后4℃保存。4、 浓缩胶（积层胶）缓冲液：0.5mmol/LTris-HCL(pH6.8):6.05gTris溶于40mlH2O中，用约48ml1mol/LHCL调至pH6.8加水稀释到100ml终体积。过滤后4℃保存。这两种缓冲液必须使用Tris碱制备，再用HCL调节PH值，而不用Tris.CL。5、10%(w/v) 十二烷基硫酸钠SDS溶液：

3、0.1gSDS，1mlH2O去离子水配制，室温保存。6、10%(w/v)过硫酸胺溶液（10%APS）：1gAP溶于10mlddH2O中，4℃保存，最好现配现用，配好的溶液在4℃保存使用2周左右，或500ulEP管－20℃。（提供两种丙稀酰胺聚合所必须的自由基）7、 TEMED原溶液：N，N，N’N’四甲基乙二胺催化过硫酸铵形成自由基而加速两种丙稀酰胺的聚合。PH太低时，聚合反应受到抑制。（现买！）以上七种试剂用于配置分离胶和积层胶8、电泳液缓冲液（1×）：3.03gTris，18.8g甘氨酸，1.0gSDS，用蒸馏水溶解至1L，

4、得0.25mol/LTris-1.92mol/L甘氨酸电极缓冲液。(先以一定的水溶解各试剂，加入磁珠在振荡器上充分混匀，后定容至1L)9、 转移缓冲液：3.03gTris、14.4g甘氨酸、200ml甲醇，加水至总量1L。(先以一定的水溶解各试剂，加入磁珠在振荡器上充分混匀，后定容至800ml，再加入200ml甲醇)10、 SDS-PAGE加样缓冲液:pH6.80.5mol/LTris缓冲液5mlSDS1.2g0.05%溴酚蓝枪沾少许粉末即可H2O3ml甘油最后加，补足至16ml分装，400ul×40管，beta-巯基乙醇使用前

5、加，每管100ul10孔——每孔上样量最多60ul；15孔——每孔上样量最多30ul11、TBS（20×）：Tris48.4gNaCl160g浓HCl30mlddH2O定容至1LNaOH调pH至7.612、TBST(1×):10mlTween-20(10×)+50ml20×TBS，加水定容至1L13、5%BSA：2gBSA+40ml（1×）TBST14、Strip：10%SDS100mlBeta-巯基乙醇3.43mlTris-Hcl（pH6.8）31.2ml水定容至500ml9、 丽春红染液储存液：丽春红S2g三氯乙酸30g磺基

6、水杨酸30g加水至100ml用时上述储存液稀释10倍即成丽春红S使用液。使用后应予以废弃。10、 脱脂奶粉5%(w/v)。11、 NaN30.02%叠氮钠(有毒，戴手套操作)，溶于磷酸缓冲盐溶液(PBS)。12、 Tris缓冲盐溶液(TBS):20mmol/LTris/HCL(pH7.5)，500mmol/LnaCl。13、 Tween20(15)鼠抗人-MMP-9(16)鼠抗人-TIMP-1。14、 过氧化物酶标记的第二抗体。15、 NBT(溶于70%二甲基甲酰胺，75mg/ml)。16、 BCIP(溶于100%二甲基甲酰胺，

7、50mg/ml)。17、 100mmol/LTris-HCL(pH9.5)。18、 100mmol/LNaCl。19、 50mmol/LTris-HCL(pH7.5)，5mmol/LEDTA。（可以参看分子克隆）