柱层析、固相萃取和制备色谱

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1、柱层析、固相萃取和制备色谱分析过程中各步骤花费的时间样品前处理61%采样6%分析6%数据处理27%分离与富集分离（separation）的概念分离是一种假设状态，在这种状态下，不同的物质被分开了（isolation）。含有m种化学组分的混合物被分成m个常量范围。把m种化学组分分成m种纯的形式，并把它们置于m个独立的容器中。利用混合物中各组分在物理或化学性质上的差异，通过适当的装置或方法，使各组分分配至不同的空间区域或者在不同的时间依次分配至同一空间区域的过程。富集（concentration）的概念：在分离的过程中使对象物质在某空间区域的浓度增加。从大量基体物质中将欲测量的组分

2、集中到一较小体积的溶液中，从而提高检测灵敏度。分离与富集的关系：富集需要借助分离的手段，在分析过程中分离与富集往往是同时实现的。富集与分离的目不同，富集只是分离的目的之一。柱层析法（柱色谱）柱色谱概述常用柱色谱介质的分类柱色谱操作流程柱色谱---概述吸附柱层析是利用吸附剂对混合试样各组分的吸附力不同而使各组分分离。当采用溶剂洗脱时，发生一系列吸附→解吸→再吸附→再解吸的过程，吸附力较强的组分，移动的距离小，后出柱；吸附力较弱的组分，移动的距离大，先出柱。常用柱色谱介质的分类无机物色谱介质氧化铝、硅胶、活性炭、膨润土、磷酸钙(凝胶型和晶型)、氧化钛和氢氧化锌凝胶等。聚合物色谱介质

3、琼脂糖、葡聚糖、纤维素和聚丙烯酰胺等。柱色谱---吸附剂氧化铝市售的层析用氧化铝有碱性、中性和酸性三种类型，粒度规格大多为100～150目。碱性氧化铝（pH9-10）：适用于碱性物质（如胺、生物碱）和对酸敏感的样品（如缩醛、糖苷等），也适用于烃类、甾体化合物等中性物质的分离。酸性氧化铝（pH3.5-4.5）：适用于酸性物质如有机酸、氨基酸等以及色素和醛类化合物的分离。中性氧化铝（pH7-7.5）：适用于醛、酮、醌、苷和硝基化合物以及在碱性介质中不稳定的物质如酯、内酯等的分离，也可以用来分离弱的有机酸和碱等。层析用硅胶为一多孔性物质，分子中具有硅氧烷的交链结构，同时在颗粒表面又有

4、很多硅醇基。非极性和极性化合物，适用于芳香油、萜类、甾体、生物碱、强心甙、蒽醌类、酸性、酚性化合物、磷脂类、脂肪酸、氨基酸，以及一系列合成产品如有机金属化合物等吸附剂硅胶柱色谱----吸附剂硅胶柱色谱操作流程—装柱硅胶浸泡于石油醚中，搅拌均匀后一次性倒入柱中预先加入溶剂敲打均匀紧密柱色谱操作流程—装柱柱色谱操作流程—拌样样品10mg溶于溶剂中，全溶加拌样硅胶100－150目1:1-1.5搅拌均匀至干必要时旋蒸至干柱色谱操作流程--拌样溶解搅拌至干柱色谱操作流程--上样均匀加到柱中柱色谱操作流程---洗脱与接收用不同比例的石油醚和乙酸乙酯进行梯度洗脱每个极性洗脱3－5个保留体积每

5、个保留体积接收10－20份馏分整个过程加低压柱色谱操作流程--浓缩浓缩方法溶剂浓缩自然挥干减压浓缩冻干柱色谱操作流程--薄层鉴定吸附剂：硅胶—CMC展开剂：C6H6—EtoAc(3:2或97：9)显色剂：（1）氨蒸气熏。（2）5%KOH喷雾制备色谱第一部分.制备HPLC概述第二部分.制备HPLC技术问题上样条件的选择循环色谱柱切换制备HPLC概述制备色谱到底是什么？结构与分析型一样，但泵流量大、进样量大、采用制备柱；柱后馏分收集器。制备HPLC概述—制备HPLC与分析HPLC比较目的填料流量流通池联系制备HPLC样品中特定成分的高纯度获取，大量、廉价的制备20μm以上为佳0.1

6、-150ml/min最大允许流速可为150mL/min在进行制备HPLC之前，常先进行分析HPLC实验，对分析方法进行优化、放大应用到制备HPLC中，详见后。分析HPLC定性分析：检测的灵敏度定量分析：分离度、再现性3-5μm0.001-9.999ml/min一般的分析池的最大允许流速仅为5mL/min，或者10mL/min制备HPLC概述—主要结构单元输液部:输液泵分离部:制备柱检测部:检测器馏分部:馏分收集器制备HPLC概述—对仪器的要求制备泵的耐压制备HPLC系统因制备柱的填料很细，分离度好，同时反压很高，整个系统对压力很敏感，制备泵要求能在制定的恒流量下,克服100-1

7、50bars反压色谱柱的柱容量（柱负荷）不影响收集物纯度时的最大进样量；一般都超载进样。但进样量超过柱容量，柱效迅速下降，峰变宽。超载可提高制备效率，以柱效下降一半或容量因子k降低10%为宜。制备HPLC概述—分离效能取决于分离速度、分辨率和上样量。对某一个分离参数进行优化常会影响到其他分离参数。分辨率速度载样量增加洗脱液流速会降低分辨率，分辨率也会因上样量过大而下降。但分辨能力并不总是制备HPLC首要考虑的因素，制备型HPLC应首先具有经济、快速的生产所需产品的能力。在许多分离工作中，需要