试验二培养基的配制与灭菌

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1、实验一、培养基的制备目的要求1.明确培养基的配制原理。2.通过对基础培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。（一）实验原理按照微生物生长发育的需要，用不同组分的营养物质人工配制而成的营养基质称培养基。培养基（medium），适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的营养基质。培养基是一切对微生物进行研究和利用工作的基础任何培养基都应具备微生物生长所需六大营养要素碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水任何培养基一旦配成，必须立即进行灭菌处理根据制备培养基对所选用的营养物质的来源，可将培养基分为三类:天然培养基2.半合成培

2、养基3.合成培养基1、牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质：牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，而NaCl提供无机盐。由于这种培养基多用于培养细菌，因此要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。2、淀粉培养基淀粉培养基（高氏Ⅰ号培养基）是合成培养基，用来培养和观察放线菌形态特征。此合成培养基的主要特点是含有多种化学成分已知的无机盐，如：KNO3，K2HPO4，MgSO4，Na

3、Cl，FeSO4等，有的合成培养基还要补加微量元素。3、马丁氏培养基主要是真菌生长所需要的碳源、氮源、无机盐、维生素等成分，均来自天然成分，也有化学成分。马丁氏是一种用来培养霉菌的培养基。4、YPD培养基YPD或YPED，又叫酵母浸出粉胨葡萄糖培养基，加入琼脂的又叫酵母膏胨葡萄糖（YPD）琼脂培养基。主要用于酵母菌的培养。（二）实验方法计算→称量→熔化→调pH（过滤）→分装→灭菌l、配制牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏3.0克蛋白陈10.0克NaCl5.0克自来水1000毫升琼脂16-18克(固体)pH7.4—7.6灭菌12

4、1℃,20-30分钟2.高氏I号培养基可溶性淀粉20.克KNO31克K2HPO40.5克MgSO4﹒7H200.5克NaCl0.5克FeSO40.01克蒸馏水1000毫升琼脂16-18克(固体)先用少量蒸馏水将淀粉溶化，然后再加盐类。pH调至7.6—7.8。3、马丁氏培养基KH2PO41克MgSO4﹒7H200.5克蛋白陈5克葡萄糖10克琼脂16-18克(固体)pH值自然，培养液1000ml加1%孟加拉红3.3ml.4、YPD培养基配方：酵母膏1%蛋白胨2%葡萄糖）2%琼脂粉16-2%pH值自然实验二、培养基的灭菌目

5、的要求1.了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用。2、掌握高压蒸汽灭菌的操作方法。3、了解干热灭菌的原理和应用，掌握干热灭菌的操作技术。4、了解紫外线灭菌的原理和方法高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌锅是一个耐高压又密闭的金属锅。它是利用在密闭条件下产生高压蒸汽来达到灭菌的效果。其温度在100oC以上，有强大的杀菌能力。因此它是一种用途广泛，效率高的灭菌工具。分类：1、卧式2、立式具体操作步骤：（1）加入适量自来水于灭菌锅中（至水位线）（2）摆入上述包装好的待灭菌的培养基，注意：不要摆得太挤，以免影响蒸汽流通和灭菌效果（3）加盖旋紧

6、螺旋，使蒸汽锅密闭不漏气（对角线均匀拧旋）（4）打开放气阀，打开电源，自开始产生蒸汽后10分钟（此时蒸汽锅内的冷空气由排气阀排尽）关紧放气阀，让温度随蒸汽压力上升而上升，当达所需压力时（15磅/时2）控制热源维持所需时间（20分钟）然后停止加热，让其自然冷却。（5）待压力降至0磅时，打开排气阀，再打开锅盖，取出灭菌物。注意：压力未降至0磅时，切勿打开锅盖，否则突然降压，招致培养基沸腾，沾湿棉塞，甚至冲出管外。（6）自锅中取出灭菌好的培养基，放置稍冷却后摆成斜面，而后至37oC恒温箱培养24小时，无菌生长，方可保存备用

7、。应用此法灭菌是否彻底的一个重要关键是在压力上升之前，必须将锅内的冷空气完全排尽，否则虽然压力表已指15磅/时，但锅内的温度还只有100oC，结果往往造成灭菌不彻底。斜面摆放示意图：干热灭菌干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越小，凝固缓慢。紫外线灭菌是用紫外线灯进行杀菌。紫外线杀菌机制主要是它诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成和DNA链的交联，从而抑制了DNA的复制。波长为200-3

8、00nm的紫外线都有杀菌能力，其中以260nm的杀菌力最强。实验报告及思考题1.培养微生物能否用同一培养基?2.培养基为什么调节pH值?所用微生物培养基的最适pH值是否相同?3.培养基为什么要灭菌后再用?